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上海永葉生物科技有限公司
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閱讀:798發布時間:2011-5-10
用為免疫動物產生抗體的抗原物質如果是人工合成的。質地比較純,免疫動物后可獲得質量好的抗血清。如果以從組織中提取的物質作為抗原,必須經過純化,保證提取物的純凈,才能獲得質量好的抗血清。某些物質的分子量比較小,抗原性弱,屬于半抗原,不易使動物產生抗體,必須把這些半抗原連接到大分子物質(載體)上,形成較為理想的免疫原,既能減少免疫注射的次數,又可節約抗原,產生良好的免疫效應,獲得高質量的抗體。
(一)載體
用為作為載體的物質較多,下列幾類可供選擇。
蛋白質類載體:人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、兔血清白蛋白(RSA)、牛甲狀腺球蛋白(TG)、血藍蛋白(Hemocyanin)以及人、牛和雞γ-球蛋白等均可作為載體。這些載體免疫活性較強,有商品供應,容易獲得,即使自選提取,操作也較方便。常用 的有TG、BSA、HAS等,以TG為好。
多肽聚合物,人工合成的多聚賴氨酸 、多聚*、多聚混合氨基酸等,可與半抗原結合,所形成的免疫原可獲高滴度、高親合度的抗血清。
大分子有機化合物和某些粉末,如聚乙烯吡咯酮、羧甲基纖維素、聚甲基丙酸酯微粒、乳膠和炭末等,可吸附半抗原,也可用來作為載體,但用這類載體合成的免疫原免疫動物,所獲抗血清的質量不穩定。
載體,尤其是大分子物質本身就是一種抗原,它們進行體內,可發揮致敏作用,激活免疫系統,從而使半抗原也可以使機體產生的抗體。因此,如果把半抗原與無免疫原性的載體結合,就不能使機體產生抗體。另外,半抗原與載體結合后,可適當延遲其降解和排出體外,從而可以發揮更久的作用。
(二)偶聯劑
半抗原和載體聯接,操作比較簡單,在一般實驗室中都可進行。但對反應條件有一定的要求:在反應過程中半抗原的免疫活性不發生改變,也不應引起載體變性到不溶解的程度。常用的方法是利用偶聯劑把半抗原和載體聯接起來。用作偶聯劑的有碳化二亞胺類、戊二醛、二異氰酸化合物和二鹵化二硝基苯等。這些偶聯劑使半抗原與載體在-COOH、-NH2或-SH等基團部位發生結合。
碳化二亞胺偶聯過程示意如下:
由反應過程可見,碳化二亞胺的偶聯作用即可以在NH2部位發生,也可發生在羧基部位。
戊二醛所起的偶合作用與碳化二亞胺有所不同,戊二醛的兩個醛基分別與載體和半抗原的-NH2結合。它起一種“橋梁”作用,而把載體與半抗原聯接在一起,其反應過程為:
在免疫原的制備中,應根據不同的半抗原選用偶聯劑。
(三)制備過程
以制備催產素(OT)免疫原為例:
(1)1mgOT,溶解于1ml 雙蒸餾水或0.25%醋酸溶液中。10mgTG溶解于1ml 0.1mol/LPBS(pH7.5)或蒸餾水內。
(2)把OT溶液與TG溶液振蕩混勻。
(3)邊攪拌邊滴加入0.25%戊二醛1ml。加畢后再攪拌5~10min,在室溫下繼續反應2~3h,就可供免疫動物用。
免疫原以新制備的為好,如果一次制備了較多的免疫原,也可保存在-40℃的低溫冰箱內備用。
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