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免疫酶組織化學技術的酶及其特點

閱讀:1355發(fā)布時間:2011-3-14

凡對抗體無毒性又具有高催化效率的酶,理論上均可標記抗體。但免疫酶組織化學技術要求酶與底物作用生成的有色產(chǎn)物能在光鏡及電鏡下觀察到,所以這些產(chǎn)物必須具備兩個條件:*,產(chǎn)物必須是不透光或不透電子的,否則不能被光鏡及電鏡觀察到;第二,產(chǎn)物必須是不溶解的,否則產(chǎn)物將發(fā)生擴散,影響其準確定位。而理想的酶也應盡可能符合下列標準:

①性質穩(wěn)定,活性高;
②該酶較易獲得純制品,而且純度要很高;
③酶與免疫球蛋白等物質結合時不喪失其活性;
④酶反應產(chǎn)物必須穩(wěn)定,不應發(fā)生擴散,影響組織學定位;
⑤酶相應底物易于保存、制備;
⑥被檢組織中沒有與底物有關的酶作為內(nèi)源性組分存在。

*具備上述條件的酶并不多見,目前常用于標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶(glucoseoxdase,GOD)、b-半乳糖苷酶、葡萄糖*、乙酰*酯酶等。其中辣根過化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶應用比較廣泛,且絕大部分免疫酶組織化學技術使用HRP酶是一種*的蛋白質催化活性物質,現(xiàn)代技術已可生產(chǎn)100%純的酶,如HRP和AKP等,它們的催化效率非常高,

分子高純度酶在lmin內(nèi)可催化10000~1000000分子的底物。酶的活性高低將依賴于下列幾種可變參數(shù):
①酶和底的濃度;
②緩沖液的pH值和鹽的濃度;
③溫度和光線。
 


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