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上海永葉生物科技有限公司
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閱讀:775發布時間:2017-8-29
石蠟包埋組織的流式細胞樣品制備
*獲得的新鮮實體組織,往往已進行石蠟包埋處理。石蠟包埋組織單細胞分散方法的建立,擴大了流式細胞術的應用范圍。
1.把石蠟包埋組織切成10~50um厚的組織片3~5片,或用乳缽研成0.5mm直徑大小顆粒狀,放入10ml的試管中;
2.加入二甲苯5~8ml,在室溫下脫蠟1~2天,視石蠟脫凈與否,更換1~2次二甲苯,石蠟脫凈后,棄去二甲苯;
3.水化:依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5ml,每步為10min,去乙醇,加入蒸餾水3~5ml,10min后棄之;
4.消化:加入2ml 0.5%胰蛋白酶(pH 1.5~2.0)消化液,置37℃恒溫水浴中消化30min,在消化期間,沒隔10min用振蕩器振蕩1次;
5.消化30min后,立即加生理鹽水終止消化;
6.經300目尼龍網過濾,未消化好的組織可做第二次消化;
7.收集細胞懸液,離心沉淀1500r/min,再以生理鹽水洗滌1~2次,離心沉淀500~800r/min,去碎片;
8.保存細胞備用
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