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技術(shù)文章

提取干血斑中的DNA樣本

閱讀:462發(fā)布時(shí)間:2017-8-23

DNA提取需在II級(jí)生物安全柜內(nèi)完成 
1.用打孔器將6mm直徑大小的DBS打入1.5ml的離心管中,用燒灼和酒精搽拭的方法消毒打孔器頭部。 
2.每個(gè)離心管中加入1ml去離子水,渦旋10秒,在管壁外側(cè)做離心方向標(biāo)記 
3.將離心管置于搖床上,轉(zhuǎn)速500-600轉(zhuǎn)/分,室溫,搖動(dòng)15分鐘; 
4.室溫下,離心管12500×g,離心3分鐘; 
5.小心從離心管中吸去上清約950μl去離子水,留50μl于管中; 
6.重復(fù)2-5步; 
7.每管中加入新鮮配置的10% Chelex100 Resin 150μl(0.1克Resin / 1ml去離子水),渦旋混勻10秒; 
8.室溫下,離心管12500×g,離心3分鐘; 
9.水浴箱中56℃,溫育2小時(shí); 
10.取出離心管輕輕振蕩; 
11.放入100℃開(kāi)水中煮沸8分鐘; 
12. 室溫下,離心管12500×g,離心3分鐘; 
13.立即小心吸取100-120μl上清(應(yīng)避免吸到Chelex100樹(shù)脂,其對(duì)PCR有抑制作用)于干凈的管中; 
14.放于-20℃保存。 
 


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