免疫磁珠捕獲與分離
應(yīng)按照生產(chǎn)商提供的使用說明進(jìn)行免疫磁珠捕獲與分離。當(dāng)生產(chǎn)商的使用說明與下面的描述可能有偏差時(shí)，按生產(chǎn)商提供的使用說明進(jìn)行。
將Eppendorff 管按樣品和質(zhì)控菌株進(jìn)行編號(hào)，每個(gè)樣品使用1 Eppendorff 管，然后插入到磁板架上。在漩渦混合器上輕輕振蕩E.coli O157 免疫磁珠溶液后，用開蓋器打開每個(gè)Eppendorff 管的蓋子，每管加入20μL E.coli O157 免疫磁珠懸液。
取mEC+n 肉湯增菌培養(yǎng)物1mL，加入到Eppendorff 管中，蓋上蓋子，然后輕微振蕩10s。每個(gè)樣品更換1 只加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行，避免交叉污染。
結(jié)合：在18℃～30℃環(huán)境中，將上述Eppendorff 管連同磁板架放在Dynal MX1 樣品混合器上轉(zhuǎn)動(dòng)或用手輕微轉(zhuǎn)動(dòng)10min，使E.coli O157 與免疫磁珠充分接觸。
捕獲：將磁板插入到磁板架中濃縮磁珠。在3min 內(nèi)不斷地傾斜磁板架確保懸液中與蓋子上的免疫磁珠全部被收集起來，此時(shí)，在Eppendorff 管壁中間明顯可見圓形或橢圓形棕色聚集物。
吸取上清液：取1 支無菌加長吸管，從免疫磁珠聚集物對側(cè)深入液面，輕輕吸走上清液。當(dāng)吸到液面通過免疫磁珠聚集物時(shí)，應(yīng)放慢速度，以確保免疫磁珠不被吸走。
免疫磁珠的滑落：某些樣品特別是那些富含脂肪的樣品，其磁珠聚集物易于滑落到管底。在吸取上清液時(shí)，很難做到不丟失磁珠，在這種情況下，可保留50μL～100μL 上清液于Eppendorff 管中。如果在后續(xù)的洗滌過程中也這樣做的話，脂肪的影響將減小，也可達(dá)到充分捕獲的目的。
洗滌：從磁板架上移走磁板，在每個(gè)Eppendorff 中加入1mL PBS-Tween20
洗液，轉(zhuǎn)動(dòng)磁板架3 次以上，洗滌免疫磁珠混合物。
免疫磁珠懸?。阂谱叽虐澹瑢⒚庖叽胖橹匦聭腋≡?00μL PBS-Tween20 洗液中。
涂布平板
用漩渦混合器將免疫磁珠混勻，用加樣器各取50μL 免疫磁珠懸液分別轉(zhuǎn)移至CT-SMAC 平板和改良CHROMagar O157 顯色瓊脂平板一側(cè)，然后用無菌涂布棒將免疫磁珠涂布平板的一半，再用接種環(huán)劃線接種平板的另一半。待瓊脂表面水分*吸收后，翻轉(zhuǎn)平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。
注：若CT-SMAC 平板和改良CHROMagar O157 顯色瓊脂平板表面水分過
多時(shí)，應(yīng)在37℃下干燥10min～20min，涂布時(shí)避免將免疫磁珠涂布到平板的邊緣。
會(huì)員1.png)