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技術文章

嗜熱鏈球菌抑制法檢測鮮乳中抗生素殘留

閱讀:1329發布時間:2014-2-14

 

 

操作步驟

原理:檢樣經過 80 ℃殺菌后,添加嗜熱鏈球菌菌液。培養一段時間后,嗜熱鏈球菌開始增殖。這時候加入代謝底物 TTC,若該樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測限,嗜熱鏈球菌將繼續增殖,還原 TTC 成為紅色物質。相反,如果樣品中含有高于檢測限的抑菌劑,則嗜熱鏈球菌受到抑制,因此指示劑 TTC 不還原,保持原色。

檢驗程序

活化菌種:取一接種環嗜熱鏈球菌菌種,接種在 9 mL 滅菌脫脂乳中,36 ℃±1 ℃培養 12 h~15h 后,置 2 ℃~5 ℃冰箱保存備用。每15 d 轉種一次。

測試菌液:將經過活化的嗜熱鏈球菌菌種接種滅菌脫脂乳,36 ℃±1 ℃培養 15 h±1 h,加入相同體積的滅菌脫脂乳混勻稀釋成為測試菌液。

培養操作:取檢樣 9 mL,置 18 mm×180 mm 試管內,每份檢樣另外做一份平行樣。同時再作陰性和陽性對照各一份,陽性對照管用 9 mL * G 參照溶液,陰性對照管用滅菌脫脂乳 9 mL。所有裝有樣品的試管置 80 ℃水浴加熱 5 min,冷卻至 37 ℃以下,加入測試菌液1 mL,輕輕旋轉試管混勻。36 ℃±1 ℃水浴培養 2 h,加 4%TTC 水溶液 0.3 mL,在旋渦混勻器上混合 15 s 或振動試管保證液體與樣品混勻。36 ℃±1 ℃水浴避光培養 30 min,觀察顏色變化。如果顏色沒有變化,于水浴中繼續避光培養 30 min 作zui終觀察。觀察時要迅速,避免光照過久出現干擾。

判斷方法:在白色背景前觀察,檢樣呈乳的原色時,指示乳中有抗生素存在,為陽性結果。檢樣呈紅色為陰性結果。如zui終觀察現象仍為可疑,建議重新檢測。

報告

zui終觀察時,檢樣變為紅色,報告為抗生素殘留陰性。檢樣依然呈乳的原色,報告為抗生素殘留陽性。

本方法檢測幾種常見抗生素的zui低檢出限為:*0.004 IU,* 0.5 IU,* 0.4 IU,* 5 IU。


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