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人類胚胎干細胞研究基本技術(shù)新方法
點擊次數(shù)：237 發(fā)布時間：2011-6-15
人類胚胎干細胞的建系比小鼠胚胎干細胞的建系有明顯的不同，小鼠胚胎干細胞的建系可以直接將囊胚放在飼養(yǎng)層細胞上，胚性細胞就可以直接長出來，但是人類胚胎干細胞必須人工除去滋養(yǎng)層細胞和透明帶。去滋養(yǎng)層細胞主要有兩種方法，一是機械法，二是免疫法。免疫法較為簡便，機械法效果較好但對實驗者技術(shù)要求較高。開始培養(yǎng)時盡量不要移動，長到一定程度后分塊傳代。一般采用鼠源細胞作為飼養(yǎng)層細胞，人類胚胎干細胞對鼠的品系要求較高，針對不同的胚胎干細胞的特性選擇不同品系鼠的細胞。飼養(yǎng)層細胞的制備一般采用膠原酶和機械法結(jié)合使用的方法，但是使用純機械的方法。在培養(yǎng)過程中可能會出現(xiàn)一些分化的細胞，這是正常現(xiàn)象，除去這些分化細胞即可。在培養(yǎng)人類胚胎干細胞的過程中，一般都采用鼠源的飼養(yǎng)層細胞，但是鼠源的飼養(yǎng)層細胞對人胚胎干細胞培養(yǎng)后的應(yīng)用有不良影響。所以人們在思考是不是可以限制飼養(yǎng)層細胞的分裂、不用飼養(yǎng)層細胞或是采用人源的飼養(yǎng)層細胞。但是后兩種方法都存在很大的困難，不用飼養(yǎng)層細胞的辦法現(xiàn)在只有很少的實驗室做出來過，難以重復(fù)，細胞容易發(fā)生突變；采用人源飼養(yǎng)層細胞的方法可以完成培養(yǎng)，但是難以建系。
分化是研究胚胎干細胞重要技術(shù)，主要用體內(nèi)和體外兩種方式。體內(nèi)分化一般是植入裸鼠皮下形成畸胎瘤。而體外分化則主要是采用形成擬胚體、共培養(yǎng)、無血清培養(yǎng)等方式。一般采用傳代次數(shù)較少（10代以內(nèi)）的細胞來進行分化實驗，因為傳代次數(shù)過多細胞易發(fā)生突變，影響分化能力。金穎教授特別提到分化實驗一個很重要的因素就是細胞不能受到支原體感染，如果有支原體感染則分化實驗難以進行，大多數(shù)時候需要更換別的沒有支原體污染的細胞進行實驗.