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709次金屬硫蛋白的純化,也就是MT粗品(60%~90%)、MT精品(≥90%)以及純品(≥95%)的形成過程。由報道的資料看,純化方法大概是一致的,首先是根據(jù)MT-1和MT-2所帶電荷不同的性質(zhì),進行離子交換將MT-1和MT-2分開,然后將收集MT-1和MT-2的層析液分別進行脫鹽,zui后收集凍干、保存。
取勻漿液直接上Sephadex G-50柱(4.5×100cm)進行分離,以0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6緩沖液洗脫。收集含MT組分層析液,再上預(yù)先用0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6緩沖液平衡好的DEAE-Sepharose Fast Flow(3×70cm)柱進行離子交換層析,以Tris緩沖液進行直線梯度洗脫(A液:0.01mol/L Tris-HCl,pH8.6; B液:0.25mol/L Tris-HCl,pH8.6)。分別收集含MT-1和MT-2組分,冷凍干燥濃縮成體積15~20mL,再分別上預(yù)先用0.01mol/L碳酸銨平衡好的Sephadex G-25柱(1.6×120cm)進行脫鹽。所得MT-1和MT-2冷凍干燥后保存于-20℃冰箱中。
雖然文獻中講到許多分離純化方法,但是多為實驗室研究,真正運用到實際生產(chǎn)的并不多,這主要與實際生產(chǎn)中的各種環(huán)境因素的影響有關(guān)。在實驗中發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)后家兔肝臟中MT的含量愈高,實際生產(chǎn)中MT的提取率就愈大,相反,MT的提取率就愈低。
金屬硫蛋白的用途:
金屬硫蛋白是一類富含半*和金屬的低分子蛋白質(zhì)。由于它大量的結(jié)合多種金屬離子,具有特種的生理功能,為生物化學(xué)領(lǐng)域所重視。
因此,金屬硫蛋白MT可應(yīng)用于包括醫(yī)藥、食品保健及化妝品添加劑、基因工程試劑、化學(xué)、環(huán)保、動物、農(nóng)業(yè)等實驗用品等等,前景十分廣闊。
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