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Taq DNA polymerase實驗常出問題及解決方案

閱讀:397發布時間:2016-11-17

Taq DNA polymerase是94 kDa的耐熱性DNA聚合酶及配合其使用的10×PCR Buffer以及6×Loading Buffer。是將改良后的DNA Polymerase的基因經過克隆轉化到大腸桿菌中進行表達后,分離純化而得到的性狀優良,功能強大的DNA聚合酶。它比天然Taq DNA聚合酶有更加強大的功能以及更加高質量的活性。具有擴增速度快、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點。使用本產品擴增得到的PCR產物的3′端會進行加“A”處理,因此,PCR產物可直接用于T載體的酶連中。

問題及解決方案:

假陰性,不出現擴增條帶
  PCR反應的關鍵環節有模板核酸的制備引物的質量與特異性酶的質量 PCR循環條件。尋找原因應逐個排除。

  1. 假陽性
      出現的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。原因可能是引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行PCR擴增時,擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。需重新設計引物。
  2. 出現非特異性擴增帶
      PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。其原因:一是引物與靶序列不*互補、 或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+濃度過高、退火溫度過低,及PCR循環次數過多有關。Mg2+濃度或者重新設計引物即可解決。

出現片狀拖帶或涂抹帶
  PCR擴增有時出現涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由于酶量過多或酶的質量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環次數過多引起。也需逐個排除。

注:內容供參考,具體產品信息請來電或在線咨詢。

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