PCR產(chǎn)物回收試劑盒說明書
本試劑盒可從PCR反應(yīng)體系中回收得到不含鹽或低鹽、不含蛋白質(zhì)、RNA 等雜質(zhì)的高純度DNA 片段。200bp-10kbp的DNA的片段回收率 80%以上，并可回收單鏈、雙鏈 DNA的片段以及環(huán)狀質(zhì)粒 DNA。回收得到的片段DNA均可直接進(jìn)行酶切、酶連、測(cè)序反應(yīng)。
本試劑盒采用一種*的平衡液處理吸附膜，該試劑能夠激活硅基質(zhì)膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，專一吸附 DNA 的作用，同時(shí)還可消除高溫/潮濕或其他不良環(huán)境因素對(duì)吸附柱造成的影響。
試劑盒組成
成分 | PD6222-5T | PD6222-50T | PD6222-200T |
Buffer PG | 2.5 ml | 30 ml | 120 ml |
Buffer BL | - | 25 ml | 100 ml |
Buffer WB | 1.5 ml | 15 ml | 2×30ml |
Elution Buffer | 0.5 ml | 5 ml | 10 ml |
吸附柱G柱 | 5套 | 50套 | 200套 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 1 份 |
Buffer PG：開蓋后如果長(zhǎng)時(shí)間未使用，請(qǐng)檢查Buffer PG的pH，確保pH≤7.5。
WB: 使用前請(qǐng)將6 ml(5T裝)/60 ml（50T裝）/240 ml（200T裝）無水乙醇加入Buffer WB（試劑瓶上有標(biāo)簽提示）。
平衡吸附柱（選做）：加入500 μl Buffer BL到吸附柱G柱中，10,000×g離心1min以平衡吸附柱。
- 按照PCR產(chǎn)物：Buffer PG=1:5的比例加入Buffer PG（例如：50 μl PCR反應(yīng)體系加入250 μl Buffer PG），顛倒混勻。若片段長(zhǎng)度小于500 bp，按照1:6的比例加入Buffer PG。
- （選做）將裝有混合液的EP管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，室溫下10,000×g離心30 sec到1min，以甩下吸附在離心管壁的殘留溶液，zui大限度提高回收率。
- 將上一步得到的混合液添加至本試劑盒提供的吸附柱G柱中（如一次無法加完，可分多次加入），室溫下10,000×g離心1 min。棄掉收集管中的廢液。如有需要，此步驟可以重復(fù)一次，對(duì)低濃度的核酸回收率有較明顯提高。
- 向吸附柱G柱中加入700 μl Buffer WB ，室溫下13,000×g離心1 min ，棄廢液。
- 重復(fù)步驟4。
- 室溫下13,000×g離心2 min以*甩下Buffer WB的殘留。
- 取出吸附柱G柱并放入新的EP管中，將吸附柱G柱開蓋室溫下靜置2 min，如有需要可放在空調(diào)風(fēng)口吹1-2 min，以*去除殘留的乙醇。
- 向吸附柱G柱正中間加入15-50 µl （建議用量為30μl）Elution Buffer或ddH2O（50℃水浴后的溶解液溶解效果更好），靜置5 min待吸附的質(zhì)粒*溶解，室溫下13,000×g離心2 min即得到回收的DNA片段。
注：回收得到的 DNA可直接用于基因克隆、擴(kuò)增、測(cè)序、酶切等。
DNA濃度(µg/ml) = OD260 × 50× 稀釋倍數(shù)，OD260/ OD280約為1.8-2.0。
本試劑盒只適用于瓊脂糖凝膠電泳產(chǎn)物回收，不適用于聚丙烯酰胺凝膠回收。試劑盒中各成分均有一定的揮發(fā)性，請(qǐng)使用完后立即蓋緊瓶蓋，以防試劑污染或者揮發(fā)而造成效果降低。
常見問題 | 可能原因 | 建議 |
回收率低 或沒條帶 | PCR液過多 | 每次PCR液總量應(yīng)當(dāng)小于 300 μl。 |
Buffer WB 中沒有 加入無水乙醇 | 確保 Buffer WB 中加入無水乙醇。 |
洗滌液使用不當(dāng) | 確保使用試劑盒提供的Buffer WB。 |
洗脫不充分 | 確保足夠洗脫時(shí)間，Elution Buffer 用前 可55℃預(yù)熱，直接測(cè)序或者酶切建議用去離子水溶解。 |
樣品過少，濃度過低 | 加大樣品用量。 |
回收產(chǎn)物 無法進(jìn)行 后續(xù)實(shí)驗(yàn) | 乙醇?xì)埩?/span> | 室溫低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)晾干時(shí)間，或放在空調(diào)前吹干殘留的乙醇 。 |
鹽殘留 | 確保洗滌液用量和洗滌次數(shù)，每次離心將液體離盡。 |
注：以上內(nèi)容供參考，具體產(chǎn)品信息請(qǐng)來電或在線咨詢。
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