石蠟切片免疫組化染色步驟
1、三步法（以SP試劑盒為例）
- 石蠟切片脫蠟至水
- 蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘，如果采用抗原修復(fù)，可在此步后進(jìn)行
- 3% H2O2 室溫孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗，2分鐘×3次
- 5~10%正常山羊血清封閉，室溫孵育10分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小時(shí)或4℃過夜
- PBS沖洗，2分鐘×3次
- 滴加適當(dāng)比例稀釋的*標(biāo)記二抗（1%BSA-PBS稀釋），37℃孵育10~30分鐘；或滴加第二代*標(biāo)記二抗工作液，37℃或室溫孵育10~20分鐘
- PBS沖洗，2分鐘×3次
- 滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素（PBS稀釋），37℃孵育10~30分鐘；或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10~20分鐘
- PBS沖洗，2分鐘×3次
- 顯色劑顯色（DAB或AEC）
- 自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水透明、封片
- 如果必要，可選用avdin封閉內(nèi)源性*
2.SABC法
- 脫蠟、水化
- PBS洗2次各5分鐘
- 用蒸餾水或PBS配制新鮮的3% H2O2 ，室溫封閉5-10分鐘，用蒸餾水洗3次
- 抗原修復(fù)
- PBS洗5分鐘
- 滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘，甩去多余液體
- 滴加Ι抗50ul,室溫靜置1小時(shí)或4℃過夜或37℃1小時(shí)
- PBS洗3次各2分鐘
- 滴加*化Ⅱ抗，20℃-37℃ 20分鐘
- PBS洗3次各2分鐘
- 滴加試劑SABC 20℃-30℃ 20分鐘
- PBS洗4次各5分鐘
- DAB顯色：試劑盒或自配顯色劑顯色
- 脫水、透明、封片、鏡檢
備注：僅供科研實(shí)驗(yàn)使用，以上內(nèi)容供參考，具體產(chǎn)品信息請來電或在線方式咨詢。
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