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廣東環凱生物科技有限公司
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EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測試劑盒【產品簡介】本試劑盒基于PCR技術，并適用于食品中EPEC、STEC和EHEC的檢測
EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測試劑盒
【產品簡介】
本試劑盒基于PCR技術，并適用于食品中EPEC、STEC和EHEC的檢測。
【檢測原理】
利用5對特異性引物和PCR反應所需其他試劑，如反應緩沖液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待檢核酸樣品，即可進行PCR擴增反應。經比對擴增產物目標條帶組合即可判定所對應的致瀉大腸埃希氏菌類別。
【產品特點】
1. 快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在3 h內完成；
2. 特異性高：由GB 4789.6?2016《食品微生物學檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗》提供的目標基因引物，保證擴增反應的高度特異性；
3. 判讀簡單：擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標條帶即可判別，直觀方便。
【儲存條件與保質期】
2~8℃條件下儲存，有效期為12個月。
【所需其他材料和適用儀器】
1. PCR儀器、高速離心機、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等；
2. 瓊脂糖、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。
【產品組分】
編號 | 組分名稱 | 規格×數量 |
-- | 干粉試劑EP | 8管×3排 |
-- | 干粉試劑ST | 8管×3排 |
-- | PCR復溶液 | 1 mL×1管 |
Y02 | 陽性對照 | 1管（凍干型） |
-- | 陰性對照 | 1管（凍干型） |
-- | 裂解液 | 1 mL×1管 |
-- | 超純水 | 1 mL×1管 |
-- | 6×Loading buffer | 240μL×1管 |
| 說明書 | 1份 |
【使用指南】
1. 樣品前處理
1) 參照GB 4789.6?2016，使用1 μL接種環刮取營養瓊脂平板或斜面上培養18 h~24h的菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
2) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
2. 加樣、反應
1) 使用時，分別加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照管中，充分溶解，-20℃存儲待用；
2) 取出凍干粉試劑EP和ST，按照需求分別剪取n個檢測試劑管（n=待檢測樣品數+1管陽性對照+1管陰性對照），每管加入18 μL復溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2 μL，緊蓋后置于PCR儀中按設定的反應程序進行擴增反應；
4) PCR反應程序如下：
3. 結果判讀
反應后每管中加入4μL 6×Loading buffer，混勻，并取8 μL樣品經1.5%瓊脂糖凝膠電泳后在紫外儀下觀察，陰性對照僅有uidA條帶擴增，陽性對照中出現目標條帶（參照圖1），PCR試驗結果成立。根據每個樣品對應的凍干粉試劑EP和ST反應產生的目標條帶種類，并查找該目標條帶組合所對應的致瀉大腸埃希氏菌類別（參照表1），即為檢測結果。若陰陽性對照管反應結果不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯系。
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