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豬口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)使用說明書
【產品名稱】
通用名:豬口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus O (ELISA)
【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑。
本試劑用于檢測豬血清中口蹄疫病毒O型抗體,可用于口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果評價。
【原 理】
本試劑盒系由預包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬口蹄疫病毒O型抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有豬口蹄疫病毒O型抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有口蹄疫病毒O型抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規格(96T×1) | 規格(96T×2) |
1. | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 抗體工作液 (藍蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽性對照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個 | 1個 |
12. | 說明書 | 1份 | 1份
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【儲存及有效期】 于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照≤0.10,陽性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.樣品A值≥0.25為陽性;樣品A值在0.15到0.25之間為可疑;樣品A值<0.15為陰性。
2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬口蹄疫病毒O型抗體,根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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