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技術(shù)文章

白細胞介素-2(interleukin-2;IL-2 )

閱讀:153發(fā)布時間:2015-7-22

其他名稱:T細胞生長因子(T cell growth factor,TCRF) 

定義:主要由活化的CD4+T細胞和CD8+T細胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細胞因子。是所有T細胞亞群的生長因子,并可促進活化B細胞增殖,故為調(diào)控免疫應答的重要因子,也參與抗體反應、造血和腫瘤監(jiān)視。 

【中文名稱】: 白細胞介素-2 

【簡寫拼音】: BXBJS-2 

【英文名稱】: Interleukin-2 

【所屬類別】: 免疫增強劑||其他抗腫瘤藥及輔助治療藥 

【別名】 白間素, 欣吉爾, T細胞生長因子 ,白細胞介素-2 

【外文名】Interleukin-2 ,IL-2 

【適應癥】 白介素-2是一個分子量為14500的糖蛋白,它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動的T細胞增殖。重組白介素-2可用于臨床研究。主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效(Rossenberg)。LAK細胞代表1個有單核巨噬細胞,B和T淋巴細胞特征的異原的細胞體。這些LAK細胞似乎對癌細胞有特異作用。此外,LAK細胞(不象T細胞)介導殺傷不受MHC的約束。[1] 

1 材料和方法:

  1.1 制備粗制IL-2無菌采血,肝素抗凝,用RPMI1640按1∶1將血液稀釋,然后重層于菲可液面上,以1 500r/min離心30min,取白細胞層,用RPMI1640洗2次,按1~3×10細胞/ml濃度加入10%胎牛血清RPMI1640,注入一裝有磁棒的大瓶中,置37℃攪拌培養(yǎng)4天,取出,分裝于50ml離心管中,1 500r/min離心20min,棄上清液,將細胞懸浮于1%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液中,使細胞濃度為106細胞/ml。同時加入純質(zhì)PHA1~2μg/ml以及多種B淋巴母細胞株,使其濃度為106細胞/ml,37℃攪拌培養(yǎng)18~24h后,取出以1500r/min離心30min,取上清,用045μg濾膜過濾除菌,濾液即為粗制IL-2。 

 2 制備精品IL2 

  2.1 硫酸銨沉淀與真空濃縮透析:在4℃下將硫酸銨粉末按50%飽和量加入上述粗制IL-2中,攪拌2h,12000g離心30min,取上清液,再加入80%飽和硫酸銨,4℃過夜,次日以12000g離心30min,棄上清液,將沉淀溶于1% PEG 6 000的1∶2 PBS溶液(pH值73)中,置真空負壓濃縮*中透析濃縮至所需容量。 

  2.2 Sephadex G100凝膠過濾:用2×180cm的過濾柱及PBS(同上),以80ml/h流速過濾。將各管洗脫液用紫外分光光度計280nm檢測其OD值。同時將幾種不同分子量的標準蛋白也用相同條件過濾及檢測其OD值,繪出IL-2及標準蛋白OD值的曲線。將各管洗脫液過濾除菌后,作白細胞生物活性試驗,按試驗結(jié)果繪出曲線,找出具有zui高IL2活性的幾管洗脫液,混合后,作下一步精制。 

  2.3 BlueSepharose層析:將上述混合后的洗脫液加入BlueSepharose柱中,流速約15ml/h,按每管10ml收集流出液,當樣品全部流出柱中以后,用上述PBS洗滌樣品柱,再用梯度NaCl溶液(從0075mol/L至06mol/L NaCl的PBS溶液)洗脫,按2ml/管收集洗脫液。NaCl 溶液梯度及流速均由梯度混合器調(diào)節(jié)控制。洗脫完畢后,作各管OD值及NaCl濃度的測定。各管洗脫液過濾除菌后,作出生物活性測定。將峰值前后的數(shù)管洗脫液混合,即為精制的IL2。置-20℃冰箱保存。 

  3 檢定 

  3.1 活性測定用10%胎牛血清RPMI1640將上述IL2稀釋為50%、25%、125%、625%,而后再將每個百分濃度以及100%濃度的IL2倍比稀釋,自1∶2至1∶128,將每個稀釋度分別加入多孔板的孔中,每孔01ml。然后取CT6細胞株(小鼠的IL2依賴性T細胞株),調(diào)整濃度為106細胞/ml,每孔加入01ml,同時用培養(yǎng)基代替IL2作對照。將多孔板培養(yǎng)24h后,取出按每孔1μci的濃度加H3標記胸腺嘧啶核苷繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出后用MESHⅡ細胞收集器過濾洗滌細胞,用β計數(shù)器測定各孔細胞的cpm。必要時按此結(jié)果繪出曲線,確定活性單位。 

  3.2 蛋白含量測定采用分光光度計,分別測得OD280及OD260,然后按下式計算:蛋白含量(mg/ml)=(144×OD280-075×OD260)×稀釋倍數(shù) 

  3.3 毒性試驗及細菌檢查參考*制備部分。 

應用

【藥理作用】 本品可促進T淋巴細胞增殖與分化,誘導具有細胞毒樣活力的殺傷細胞,誘導及增強殺傷性T細胞、單核細胞、巨噬細胞的活力等。 

【臨床應用】 適用于慢性活動性乙型肝炎病毒感染等 

【用法用量】 靜脈滴注:每次2.5萬-5萬U,每日1次。 

【不良反應】 常見發(fā)熱、寒戰(zhàn)等反應。1.消化系統(tǒng):惡心、嘔吐、腹瀉、結(jié)腸局部壞死或穿孔。 2.呼吸系統(tǒng):可致間質(zhì)性肺水腫、呼吸性堿中毒。3.神經(jīng)系統(tǒng):可發(fā)生行為變化、認知障礙。4.心血管系統(tǒng):可出現(xiàn)低血壓、心動過速、心律失常等癥狀。5.血液系統(tǒng):可出現(xiàn)中性粒細胞上升,淋巴及單核細胞下降。6.泌尿系統(tǒng):出現(xiàn)少尿、體液潴留、氨質(zhì)血癥。可出現(xiàn)內(nèi)分泌功能紊亂,血鈣、血磷下降,*缺乏。 

【規(guī)格】 粉針劑:1000u,10000u, 10萬u, 100萬u. 

注意事項:癲癇、嚴重低血壓,心、腎功能不全,高熱者禁用。孕婦、患有心臟病或肺部疾病、60歲以上者慎用。用藥期間應定期查肝、腎功能。


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