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上海酶聯生物研究所
上海酶聯生物研究所
閱讀：540發布時間：2012-2-27
用途：
單核細胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）又稱單核細胞趨化和激活因子（monoctye chemotactic and activating factor,MCAF），屬于C-C亞族（β亞族）成員。MCP-1/MCAF起初是從人髓樣單核細胞系THP-1、神經膠質瘤細胞系以及LPS或PHA刺激的人PBMC培養上清中發現。目前已知，單核細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、內皮細胞、B細胞、平滑肌細胞等在PHA、LPS、Poly I-C、IL-1、IFN-γ、PDGF、EGF或某些病毒刺激下均可被誘導分泌MCP-1。某些腫瘤細胞系則可組成性產MCP-1。
人MCP-1/MCAF基因定位于第17對染色體。人MCP-1前體長99個氨基酸，切除23個氨基酸先導序列后形成76氨基酸的成熟分子，為堿性蛋白。非糖基化的MCP-1分子量8.7kDa，經不同糖基化后MCP-1分子量有13kDa兩種。MCP-1分子中11與36Cys和12與52Cys之間所形成兩個鏈內二硫鍵以及Try28和Arg30，對于MCP-1的生物學活性是必需的。在氨基酸水平上，MCP-1與另外兩種單核細胞趨化蛋白MCP-2（HC14）和MCP-3（NC28）分別有62%和72%同源性，與C-X-C亞族中IL-8有24%同源性。
體內和體外實驗均證實了MCP-1對單核細胞具有趨化活性，激活單核細胞和巨噬細胞，使其胞漿內Ca2+濃度升高，超氧陰離子的產生和釋放，并釋放*，上調單核細胞和巨噬細胞粘附分子如integrin家族β2組和α4分子的表達和細胞因子IL-1、IL-6的產生，活化的巨噬細胞可抑制腫瘤細胞的生長。MCP是嗜堿性粒細胞的趨化劑和激活劑，尤其是刺激嗜堿性粒細胞脫顆粒和組胺釋放的作用較為強烈。MCP-1與MCP-1R發生特異性的結合，此受體主要分布于單核細胞、髓樣前體細胞系和嗜堿性粒細胞，屬于IL-8R家族。分布于人紅細胞表面的Duffy抗原也可結合MCP-1。
風濕性關節炎病人的滑液和血清中MCP-1水平明顯升高，滑液組織巨噬細胞組成性地產生MCP-1，提示MCP-1與風濕性關節炎的病理損傷有關。高*血癥時，動脈內側平滑肌細胞產生高水平MCP-1，單核細胞粘附于血管壁并浸潤動脈壁。腎臟炎癥時，IL-1誘導腎小球細胞產生MCP-1。高血脂癥時，LDL與腎小球細胞結合，刺激其產生MCP-1，趨化單核細胞在局部浸潤。
本試劑盒用于定量檢測兔血清中的MCP-1的濃度。
原理：
本試劑盒采用雙抗夾心ELISA法。抗兔MCP-1單抗包被于酶標板上，兔標本中的MCP-1會與單抗結合。加入*化的抗兔MCP-1（二抗），它將與結合在單抗上的兔MCP-1結合而形成免疫復合物，未結合的將被洗去。辣根過氧化物酶標記的Streptavidin 將與二抗的*結合，多余的物質會被洗掉。加入TMB顯色。兔MCP-1的濃度與OD（450nm）成正比。
試劑盒組成：
酶標板（Coated Wells） 48wells Anti-rabbit MCP-1 Biotin 1 vial
濃縮洗滌液（100X）（Washing Concentrate） 5ml 標準品（Standards） 1 vial
顯色液（TMB Substrate） 6ml 標準品稀釋液（Standard Diluent） 7ml
終止液（Stop Solution） 5ml 濃縮酶聯物（HRP） 1 vial
酶聯物稀釋液（HRP Diluent） 7ml *稀釋液（Biotin anti MCP-1 Diluent） 7ml
需要但未提供的材料
可在450nm處進行讀數的酶標儀；
能吸取10-200µL的移液器；
可調多道（8）移液器（50－200µL）；
供可調多道移液器使用的試劑存放槽；
洗瓶或洗板機；
蒸餾水或去離子水；
1升的圓柱形量筒；
血清移液器：1和（10或25 mL）；
移液器槍頭；
紙巾；
計時器，用以監控溫育步驟；
處理池和消毒劑（例如：0.5% 次氯酸鈉, 10% 家用漂白水）；
注意事項:
嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入HRP或底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。
避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
在儲存和溫育時避免強光直接照射。
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
不能使用過期產品。
如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。
保存：
貯藏于2-8°C。
樣品：
在此檢測中，可使用血清樣品。
準備工作：
濃縮洗滌液（100X）用雙蒸水稀釋成1X（至500ml）。
標準品用1ml標準品稀釋液復溶。得到1500pg/ml的高濃度標準品。高濃度標準品可保存于-20°C。
將1500pg/ml的高濃度標準品稀釋成一組標準品，如： 750, 375, 187.5, 93.75, 46.875, 23.4, 11.7, 0pg/ml。
配制1x HRP：一支 HRP加入6 ml 酶聯物稀釋液，混勻。1x HRP在臨用前15分鐘配制。
配制1x Biotin：一支Biotin anti rabbit MCP-1加入6 ml Biotin稀釋液，混勻。1x Biotin在臨用前15分鐘配制。
操作步驟：
試劑盒應平衡至室溫（20-25°C ）再試驗。 取出所需反應板。
臨用前15分鐘配制工作液
加入100ul標準品（Standards）、100ul標本于相應反應板孔中。
輕輕混勻30秒，封住板孔，37°C溫育 60分鐘。
洗板：甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板（每孔內加入350ul洗滌液），并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；反復洗滌5次。
每孔加入100ul 1x Biotin。輕輕混勻30秒，封住板孔，37°C溫育 60分鐘
洗板：甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板（每孔內加入350ul洗滌液），并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；反復洗滌5次。
每孔加入100ul 1x HRP。輕輕混勻30秒，封住板孔，37°C溫育 30分鐘
洗板：甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板（每孔內加入350ul洗滌液），并去除水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；反復洗滌5次。
每孔加入100ul TMB顯色液， 輕輕混勻10秒，37°C暗處溫育15±10分鐘。
每孔加入100ul終止液（Stop Solution）。輕輕混勻30秒；30分鐘內在450nm處讀OD值。
以OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。根據樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
注意事項：
作標準曲線時，要扣除標準品稀釋液造成的本底；如果標本用標準品稀釋液稀釋，也要扣除標準品稀釋液造成的本底，如果標本未用標準品稀釋液稀釋，標本不需扣除標準品稀釋液造成的本底。
*（Biotin anti rabbit MCP-1） 和濃縮酶聯物（HRP）用前應離心，使液體位于管底。
商鋪：http://www.kindlingtouch.com/st32881/
主營產品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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