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上海酶聯生物研究所
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閱讀：346發布時間：2011-12-12
5-brdu 的分子量為307.1，將100mg分為三份30.7mg（0.1mmol），溶于1ml三蒸水，分裝-20度保存。用的時候再稀釋100倍，如在1ml 溶液里加入10ul即可。盡量分裝為小劑量，如100ul，避免反復凍融使其活性降低。
1、BudR貯存液的配制
BudR 5mg（先用0.5ml 1N NaOH溶解）然后加蒸餾水至5ml，即成1000ug/ml的貯存液，因BudR遇光會發生分解，貯存液需置棕色瓶并黑紙封瓶避光冰凍保存。 一般用的是用10μg/ml終濃度。
2、終止細胞培養前，加入BrdU（終濃度為30μg/L），37℃，孵育40min。
3、棄培養液，玻片用PBS洗滌3次。
4、甲醇/醋酸固定10min。
5、經固定的玻片空氣干燥，0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6、5％正常兔血清封閉。
7、甲酰胺100℃，5min變性核酸。
8、冰浴冷卻后PBS洗滌，加1抗即抗小鼠BrdU單抗（工作濃度1：50），陰性對照加PBS或血清。
9、按ABC法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數，計算標記指數（LI）。
細胞以1.5×105/ml細胞數接種于直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4%FCS培養液同步化3天，使絕大多數細胞處于G0期。
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