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上海酶聯(lián)生物研究所


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經(jīng)營模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:4010條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:采購部 (經(jīng)理)

技術(shù)文章

免疫熒光實驗步驟說明

閱讀:604發(fā)布時間:2010-11-3

1) 細(xì)胞準(zhǔn)備。

對單層生長細(xì)胞,在傳代培養(yǎng)時,將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片,PBS洗兩次;對懸浮生長細(xì)胞,取對數(shù)生長細(xì)胞,用PBS離心洗滌(1000rpm,5min)2次,用細(xì)胞離心甩片機制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片。
(2) 固定。

根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞。固定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5 min。
(3) 通透。

使用交聯(lián)劑(如多聚甲醛)固定后的細(xì)胞,一般需要在加入抗體孵育前,對細(xì)胞進行通透處理,以保證抗體能夠到達抗原部位。選擇通透劑應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì)。通透的時間一般在5-15min。通透后用PBS洗滌3×5 min。
(4) 封閉。

使用封閉液對細(xì)胞進行封閉,時間一般為30min。
(5) 一抗結(jié)合。

室溫孵育1h或者4℃過夜。PBST漂洗3次,每次沖洗5min。
(6) 二抗結(jié)合。

間接免疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h。PBST漂洗3次,每次沖洗5min后,再用蒸餾水漂洗一次。
(7) 封片及檢測。

滴加封片劑一滴,封片,熒光顯微鏡檢查。

 


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