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上海酶聯生物研究所
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閱讀：831發布時間：2010-6-22
關于液相維護的一些小知識
一、混合溶劑必須要過濾以后才能混合，萬一要混合后過濾的話，只能用有機的，不能用水系的。因為水系的材料是纖維素，有機相回或多或少的溶解一點纖維素的，造成污染。
二、標樣或樣品用流動相溶解（排除特殊情況），可以避免很多麻煩。
三、給色譜柱加溫，溫度升高的目的，部分在于增加溶質的溶解度，但更重要的是降低溶劑的黏度，從而改進峰形和分離度。注意：溫度升高會降低保留時間，這對分離度也有影響，溫度的變化對譜帶寬度的影響甚大，而塔板高度受溫度的影響雖然也取決于所采用的色譜類型，而溫度升高總是要降低塔板高度的。
四、C18柱的柱溫一般不要超過40攝氏度，否則健合相容易脫落的。
五、進樣器使用，除每次用水清洗外，隔一段時間后，用甲醇或乙腈反復吸取，清洗一下。
六、用HPLC進行分析時保留時間有時發生漂移，有時發生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關于漂移問題：
1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2、流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等
3、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡
七、關于快速變化問題
1、流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定
2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合
八、液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?
1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子
九、毛細管色譜分流進樣時，非線性分流的主要原因是什么?
1、進樣器溫度太低，樣品汽化不*，發生分級分流。
2、進樣器溫度太高，某些組分可能發生熱分解，也有的樣品可能發生催化分解，或樣品部分地被吸附在進樣器內表面上。
3、在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。
4、系統的進樣墊，柱接頭等地方漏氣。
十、做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因何在?如何解決?
答：原因可能有：
1、泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；
2、比例閥失效，更換比例閥即可。
3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
5、系統檢漏，找出漏點，密封即可。
6、梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
十一、做PGS／MS分析時，如何防止焦油狀污染物進入毛細柱?
答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時，常有焦油狀物質產生。為防止這種焦油狀物質進入毛細柱造成污染而使柱性能下降，可采用保護預柱，即在裂解器與毛細柱之間接一填充預柱，通過控制預柱溫度而使焦油狀物質滯留在預柱內，預注可置于GC氣化室內，這樣既容易控制溫度，又減少系統的死體積，當然，預柱填料需經常更換。
十二、我zui近更換了另一種牌號的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時間不能重現，為什么?
答：這是因為被分析物可能具有形成氫健的能力。盡管過去幾年來，填料的制造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺（TEA），將會使硅醇基的成鍵能力飽和，從而保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現性。
十三、高溫毛細柱的使用壽命一般為多長?
答：毛細柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度、樣品狀態，進樣量等，如果在其使用溫度范圍內，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間。
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