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技術文章

48T人IgA型抗內皮細胞抗體ELISA試劑盒

閱讀:416發布時間:2012-9-3

人IgA型抗內皮細胞抗體ELISA試劑盒          

本試劑僅供研究使用      標本:血清或血漿

試驗原理:
    AECA-IgA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知AECA-IgA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將AECA-IgA和*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中AECA-IgA的濃度呈比例關系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人IgA型抗內皮細胞抗體ELISA試劑盒

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人IgA型抗內皮細胞抗體ELISA試劑盒

操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

人IgA型抗內皮細胞抗體ELISA試劑盒

結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的AECA-IgA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的AECA-IgA含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-800ng/ml

4、敏感度: 1.0 ng/ml

OVA/APC 熒光素APC標記雞卵白蛋白 0.1ml
HSA(Human serum albumin)/APC 熒光素APC標記* 0.1ml
AACT/APC 熒光素APC標記胰* 0.1ml
Goat anti-human Fibrinogen/APC 熒光素APC標記羊抗* 0.1ml
ILTV(Infectious Laryngotracheitis Virus) 抗雞傳染性喉氣管炎病毒抗體 0.2ml
ING1/p33(inhibitor of growth gene 1) 生長抑制因子基因1抗體 0.2ml
IMP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3) 胰島素樣生長因子ⅡmRNA結合蛋白3抗體 0.2ml
Inhibin α 抑制素α抗體 0.2ml
Inhibin beta A(Activin A activin AB alpha polypeptide; Activin A) 抑制素beta A抗體 0.2ml
Inhibin beta B 抑制素βB抗體 0.2ml
Insulin 胰島素抗體 0.1ml
Goat anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記羊抗人IgG 0.1ml
Goat anti-bovine IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記羊抗牛IgG 0.1ml
Insulin 胰島素抗體 0.2ml
Insulin Receptor-α(ISR-α) 胰島素受體-α抗體 0.1ml
Insulin Receptor-α(ISR-α) 胰島素受體-α抗體 0.2ml
Integrin α3/CD49c(Integrin alpha 3) 整合素α3抗體 0.1ml
Integrin α3/CD49c(Integrin alpha 3) 整合素α3抗體 0.2ml
Integrin β5 整合素β5抗體 0.1ml
Integrin alpha 1 整合素α1抗體 0.1ml
Rabbit anti-Dog IgG/APC 熒光素APC標記兔抗狗IgG 0.1ml
Rabbit anti-Rat IgG/APC 熒光素APC標記兔抗大鼠IgG 0.1ml
Integrin β7 整合素β7抗體 0.1ml
L-Citrulline 抗L-瓜氨酸抗體 0.2ml
LDH(Lactate Dehydrogenase) 抗乳酸脫氫酶抗體 0.2ml
Lectin (Mannan-binding lectin; L-MBP) 抗凝集素抗體 0.2ml
Integrin αVβ1(Integrin alpha V + beta 1) 整合素αVβ1抗體 0.2ml
Integrin αVβ3(Integrin alpha V+beta 3/CD51+CD61) 整合素αVβ3抗體 0.2ml
Integrin αVβ5 (Integrin alpha V + beta 5) 整合素αVβ5抗體 0.2ml
Integrin αE/CD103 整合素αE抗體 0.2ml
IQGAP1(IQ motif containing GTPase activating protein 1) 支架蛋白抗體 0.2ml
IRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干擾素調節因子抗體 0.2ml
human CD71 Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人CD71 單抗 100T
human IgG Monoclonal antibody/FITC 熒光素FITC 標記的抗人IgG 單抗 100T
IRAK4(IL-1 Receptor-associated Kinase 4) 白介素-1受體相關激酶4抗體 0.2ml
IL-1Rα (Interleukin-1 receptor antagonist) 白介素-1受體拮抗劑抗體 0.2ml
Rabbit anti-bovine IgG/Gold 金標記兔抗牛IgG(10或15nm) 1ml
Rabbit anti-Bovine IgM/Gold 金標記兔抗牛IgM (10或15nm) 2ml
IL-1RⅠ(interleukin-1 receptor Ⅰ) 白介素1受體Ⅰ抗體 0.1ml
IL-1RⅠ(interleukin-1 receptor Ⅰ) 白介素1受體Ⅰ抗體 0.2ml
IL-1RⅡ(interleukin-1 receptor Ⅱ) 白介素1受體Ⅱ抗體 0.2ml
IRF-4(Interferon regulatory factor 4) 干擾素調節因子4抗體 0.2ml
ILT2/CD85j(Immunoglobulin-like transcript 2) 細胞表面免疫球蛋白樣轉錄因子2抗體 0.2ml
IRS P53 (Insulin receptor substrate P53) 胰島素受體底物p53蛋白抗體 0.1ml
IRS P53 (Insulin receptor substrate P53) 胰島素受體底物p53蛋白抗體 0.2ml
IRS-1 胰島素受體底物-1抗體 0.2ml
IRS-2 胰島素受體底物-2抗體 0.2ml
IRS-3 胰島素受體底物-3抗體 0.2ml
IRS-4 胰島素受體底物-4抗體 0.2ml
ISR-α (Insulin Receptor-α) 胰島素受體-α抗體 0.1ml
ISR-α (Insulin Receptor-α) 胰島素受體-α抗體 0.2ml
ISR-β (Insulin Receptor-β) 胰島素受體-β抗體 0.2ml
ISR(Insulin Receptor)(hu, cattle, mo, rat, horse, sheep, Rb, dog, chi) 胰島素受體抗體 0.1ml
ISR(Insulin Receptor)(hu, cattle, mo, rat, horse, sheep, Rb, dog, chi) 胰島素受體抗體 0.2ml
Integrin α4/CD49d(Integrin alpha 4) 整合素α4抗體 0.1ml
Integrin α4/CD49d(Integrin alpha 4) 整合素α4抗體 0.2ml
Integrin a7(integrin alpha 7) 整合素α7抗體 0.2ml
Integrin β1/CD29(integrin beta 1) 整合素β1抗體 0.1ml
Integrin β1/CD29(integrin beta 1) 整合素β1抗體 0.2ml


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