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弓形蟲抗體IgG(TOX Ab-IgG)檢測

點擊次數:1173 發布時間:2010-8-24

 

[測定方法ELISA
    [方法學原理在微孔表面包被純化的弓形體抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在弓形蟲抗體IgG可與微孔上抗原相結合。然后洗去未結合物質,再加入酶聯液,與抗原抗體復合物結合、洗去過量的酶聯液。zui后加入底物和色原顯色液。在特定時間終止酶聯液的催化反應。所產生的顏色強度與標本中弓形蟲抗體IgG含量呈正相關。通過酶標儀與校正和對照相比,讀出結果。
    [標本準備靜脈抽血2ml,不抗凝。
    [試劑]
    1.微孔板
    2.樣品稀釋液
    3HRP-抗人IgG酶結合物
    4.陰性對照
    5.陽性對照
    6.洗滌劑
    7TMB顯色液
    [儀器設備酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
    [測定步驟
    1.吸取5ul血清標本加入250ttl標本稀釋液中,做151稀釋。
    2.吸取100gl稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液不稀釋,加入微孔板內,設空白對照1孔。振蕩,混勻,去除孔內液體中氣泡,室溫環境中孵育20min
    3.棄去孔內液體,用洗滌液洗5次。
    4.每孔再加入100~1酶聯結合物,室溫環境中孵育20min
    5.棄去孔中酶聯液,用洗滌液洗5次。
    6.每孔加入100gl TMB顯色液,室溫環境中孵育10min
    7.每孔加100ul終止液,終止反應,充分混勻。
    8.用酶標儀波長為450nm)讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
    [注意事項]
    1.整個檢測過程應符合實驗室質量手冊和生物安全守則規定,嚴防交叉污染。
    2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    3.試劑應保存于28冰箱,使用前應在室溫環境中平衡30min
    4.洗滌時各孔均應加滿洗滌液,防止孔內有游離酶未洗凈,每次洗板后均應在吸水紙上扣干。
    5.血標本應分離出血清保存,2—8可保存7d,冷凍保存可至6個月,避免反復凍融。
    6.試劑在儲存或使用過程中,禁止過熱、曝曬或強光。
    [正常參考值]  TOXAb-IgG陰性

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