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PCR技術
點擊次數：1133 發布時間：2016-12-23
PCR: Polymerase chain reaction，即聚合酶鏈反應。是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。
PCR技術的發展歷史
1985年關于PCR 的文章由美國科學家Kary Mullis等人在 《Science》雜志上發表 。
1989年《Science》雜志報道了耐熱性DNA多聚酶 Taq酶（生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內提取到的一種耐熱的DNA聚合酶 ）的發現,預示著分子時代的到來。12月《Science》雜志將PCR和它所使用的聚合酶命名為*個“年度分子”。
1993年Kary Mullis 因PCR的發明獲得諾貝爾化學獎。
PCR技術的原理
遺傳物質由細胞核、染色體、DNA（脫氧核糖核酸和磷酸鏈和堿基構成)、堿基（A、T、C、G）是按雙鏈螺旋排列的，堿基序列的長度和排列的順序決定了生物的多樣性。比如人類體細胞中共有31億個堿基對，按上述的0.1%的差，人和人之間有3百萬個堿基對的差別。
PCR的基本工作原理就是以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板互補的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復制的機理沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。
PCR反應的基本成分包括7種基本成分：模板DNA、特異性引物、熱穩定DNA聚合酶、脫氧核苷三磷酸（dNTP）、二價陽離子、緩沖液及一價陽離子?；痉磻襟E ：變性--退火--延伸。zui后通過染料如EB染色DNA后在紫外燈下顯色檢出。
PCR技術的注意事項
1、防止污染，建立良好的質量控制。操作時避免氣溶膠產生，特別注意陽性樣品的拿放，使用一次性耗材，穿戴手套并經常更換，永遠在zui后一步才加核酸，液體分裝使用等。
2、引物設計合理。
3、Taq酶擴增錯誤率較高，大約1/100對堿基/20個循環。
4、鎂離子濃度對反應效率的影響。
5、儀器穩定性，升降溫速率，管子的密合度等。
6、RT-PCR注意防止RNA降解。