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技術(shù)文章

雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

閱讀：709發(fā)布時(shí)間：2010-12-25

1．雜交瘤細(xì)胞的凍存 及時(shí)凍存原始孔的雜交瘤細(xì)胞每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞是十分重要的。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能發(fā)生細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失等等。如果沒有原始細(xì)胞．的凍存，則可因上述意外而前功盡棄。雜交瘤細(xì)胞的凍存方法同其他細(xì)胞系一樣，原則上海支安瓿含1×106個(gè)以上個(gè)細(xì)胞，但對(duì)原始孔的雜交瘤細(xì)胞可以因培養(yǎng)環(huán)境不同而改變，在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，當(dāng)長(zhǎng)滿孔底時(shí)，1孔就可以裝1支安瓿凍存。細(xì)胞凍存液為50％小牛血清、40％不*培養(yǎng)液、10％DMSO。凍存液預(yù)冷，操作動(dòng)作輕柔、迅速。凍存時(shí)從室溫降至0℃后放人一70℃超低溫冰箱，次日轉(zhuǎn)入液氮中。也可用細(xì)胞凍存裝置進(jìn)行凍存。凍存細(xì)胞要定期復(fù)蘇，檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性，在液氮中細(xì)胞可保存數(shù)年或更長(zhǎng)時(shí)間。

2．細(xì)胞復(fù)蘇方法 將玻璃安瓿自液氮中小心取出，放37℃水浴中，在Irain內(nèi)使凍存的細(xì)胞解凍，將細(xì)胞用*培養(yǎng)液洗滌兩次，然后移人前一天已制備好的飼養(yǎng)層細(xì)胞的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置37℃、5％C02孵箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞形成集落時(shí)，檢測(cè)抗體活性。

 


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