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探針標(biāo)記探針的種類(lèi)

閱讀：1566發(fā)布時(shí)間：2010-12-23

所謂探針，一般是指用來(lái)檢測(cè)某一特定核苷酸序列或基因序列的DNA片段或RNA片段。但要使探針DNA片段能實(shí)際應(yīng)用，必須使DNA或RNA分子帶上可識(shí)別的信號(hào)標(biāo)志，以便跟蹤觀察探針與其同源的核苷酸序列發(fā)生雜交反應(yīng)的位置，被探測(cè)DNA或RNA片段上的大小、雜交信號(hào)的強(qiáng)弱等。目前應(yīng)用zui多的是核素標(biāo)記方法或非核素標(biāo)記方法。

根據(jù)探針核酸的不同來(lái)源可將探針?lè)譃閑DNA探針、基因組DNA探針、寡核苷酸探針和RNA探針。

1．cDNA探針 通過(guò)反轉(zhuǎn)錄獲得cD—NA后，將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體，通過(guò)擴(kuò)增重組質(zhì)粒而使eDNA得到大量擴(kuò)增。提取質(zhì)粒后，用限制酶消化重組質(zhì)粒，將cDNA片段切割下來(lái)，分離純化，即可作為探針使用。cDNA探針是目前應(yīng)用的一種探針。

2．基因組DNA探針 從基因組文庫(kù)中篩選得到一個(gè)特定基因（或基因片段）的克隆后，大量擴(kuò)增、純化，切取插入片段，分離純化，即可作為探針使用。基因組DNA探針含有內(nèi)含子序列，但也可以?xún)H僅使用某一內(nèi)含子序列作為探針。

3．RNA探針 采用基因克隆和體外轉(zhuǎn)錄的方法可以得到RNA或反義RNA，作為探針使用。將目的基因克隆到帶有SP。或T，啟動(dòng)子的質(zhì)粒中，插入到啟動(dòng)子下游，用適當(dāng)?shù)南拗泼冈诓迦胄蛄械南掠吻袛噘|(zhì)粒使之線(xiàn)性化，加入RNA聚合酶、ATP、GTP、CTP和[a—32P]—UTP，以目的基因的DNA為模板，轉(zhuǎn)錄合成出高放射性的RNA探針。

4．寡核苷酸探針 根據(jù)已知的核酸序列，采用DNA合成儀合成一定長(zhǎng)度的寡核苷酸片段，亦可作為探針使用。若不知核苷酸序列，可根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸序列推導(dǎo)出核酸序列，合成相應(yīng)的寡核苷酸片段作為探針。此種情況下需要考慮到密碼子具有簡(jiǎn)并性，采用推導(dǎo)的序列制備探針，其特異性可能不夠高。寡核苷酸片段長(zhǎng)度在十幾個(gè)核苷酸以上就能作為雜交探針。

 


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