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上海源葉生物科技有限公司
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閱讀:3995發(fā)布時(shí)間:2010-12-18
Northern雜交是指將待測RNA樣品經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上,然后與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行固相液相雜交,用以檢測RNA的方法。其原理和方法與Southern雜交基本相同。兩者的區(qū)別主要在以下3個(gè)方面。
(一)檢測對象
所檢測的靶核酸是RNA。Northern雜交可用來對特異性mRNA定量以及確定其分子量。可以提取細(xì)胞總RNA直接電泳,用于mRNA和Northern分析,也可將mR—NA從總RNA中純化出來,然后再電泳分離,用于Northern分析。RNA極易被環(huán)境中的RNA酶降解,因此在制備RNA樣品時(shí)需要特別注意防止RNA被降解。所有器皿都要進(jìn)行處理,盡可能除盡RNA酶。
(二)RNA電泳
RNA樣品依其分子量大小在變性膠中進(jìn)行分離,凝膠中需加入變性劑(如乙二醛、甲醛、甲基氫氧化汞),防止RNA分子形成二級結(jié)構(gòu)(發(fā)夾結(jié)構(gòu)),維持其單鏈線性狀態(tài)。
(三)轉(zhuǎn)膜
電泳結(jié)束后,Northern雜交不需要再進(jìn)行變性和中和,直接采用毛細(xì)管虹吸法將膠中的RNA轉(zhuǎn)移至膜上,也可采用電轉(zhuǎn)移或真空轉(zhuǎn)移法。
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