自1967年以來，人們習慣把等電點聚焦簡稱電聚焦（isoelectrofocusing，IEF）。電聚焦電泳法是在一定抗對流介質（如凝膠）中加入兩性電解質載體，直流電通過時便形成一個由陽極到陰極pH值逐步上升的梯度。這種梯度稱為載體兩性電解質pH梯度（carrierampholytepHgradient），若將緩沖基團變為凝膠介質的一部分，形成的pH梯度稱固相pH梯度（immobilizedpHgradient，IPG）。兩性化合物在此電泳過程中就被濃集在與其等電點相等的pH區域，從而使不同化合物能按其各自等電點得到分離。從分辨率看，采用固相pH梯度介質的效果較好。
鑒于電聚焦電泳法有濃縮效應、分辨率高、操作方便、設備簡單和費時少等特點，它在蛋白質的等電點測定、純度分析以及制備電泳純樣品等方面已得到較廣泛的應用，但對于在等電點時發生沉淀或變性的樣品卻不適用。
（一）pH梯度的形成
若將pK和pI值各自相異卻又相近的兩性電解質溶液傾倒入電泳支持物中，當電流通過時，等電點zui小的兩性電解質（pI1）在中性溶液介質中發生解離，帶負電荷，向以硫酸為電極溶液的正極方向泳動。當它泳動到陽性端支持物時，與正極溶液電離出來的H+中和失去電荷，停止泳動，這時緩沖力大的載體兩性電解質就使周圍溶液的pH等于其等電點pI1。同理，等電點稍大的兩性電解質（pI2）也向正極移動，當泳動到等電點zui小的兩性電解質（pI1）陰時，就不能再向前泳動。如果穿過pI1區域，則pI2兩性電解質帶正電荷，反過來向陰極移動。所以該電解質一定位于pI1的陰。依此類推，經過適當時間的電泳后，pK和pI值各自相異卻又相近的兩性電解質將依等電點遞增的次序在支持物中正極排向負極，彼此互相銜接，形成一個平滑穩定的由正極向負極逐漸上升的pH梯度。
（二）電聚焦分離蛋白質的過程
蛋白質是典型的兩性電解質，它所帶的電荷隨著溶液酸堿度的變化而變化，即在酸性溶液中帶正電荷，在堿性溶液中帶負電荷。因此，蛋白質在外加電場作用下向正極，或向負極泳動。例如，當一個等電點為pIa的蛋白質置于從正極向負極逐漸遞增的穩定平滑pH梯度支持物的陰時，因為處在堿性環境中帶負電荷，故在電場作用下向正極移動，當泳動到pH值等于其pIa的區域時，泳動將停止。如果將此蛋白質放在陽，則帶正電荷，向負極移動，zui后也會泳動到與其等電點相等的pH值區域。因此，無論把蛋白質放在支持物的哪個位置上，在電場作用下都會聚焦在pH＝pIa的地方，這種行為叫聚焦作用。同理，如將等電點分別為pI1，pI2……pIa的蛋白質混合物置于pH梯度支持物中，在電場作用下經過適當時間的電泳，其各組分將分別聚焦在支持物中pH值等于各自等電點的區域，形成一條一條的蛋白質區帶，這既是等電聚焦分離蛋白質的過程，也是等電聚焦的基本原理。
