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蛋白芯片技術的應用研究存在的問題及應用前景

閱讀:1938發(fā)布時間:2010-11-20

目前,學者們正在開展有關蛋白芯片技術應用的研究,Holt等利用蛋白芯片技術篩選能夠相互結合的特異抗體抗原成分,他們利用12種表達較強但尚未接觸任何抗原的抗體片段篩選含有27 648種人胎腦蛋白的蛋白芯片,從中找出了4組高度特異性的抗原(蛋白)抗體復合物,其中有3種抗體結合的蛋白質功能未明,但是由于表達水平都較低,說明這種抗原抗體的結合技術是一種具有較高特異性和敏感性的篩選方法,可以用于高通量篩選分離各種不同的抗體成分,或檢測基因的表達和蛋白分子間的相互作用,這將有助于對某些疾病(包括腫瘤)的發(fā)病分子水平機制的研究,以及協(xié)助尋找疾病診斷和治療的靶分子。根據(jù)蛋白芯片技術的基本原理,可以將不同的抗體固定于載體上成為抗體蛋白芯片,用于檢測不同組織產(chǎn)生的蛋白質。

Ge在蛋白質的相互作用的研究中,采用了一種通用的蛋白質芯片系統(tǒng),該系統(tǒng)敏感有效,用途廣泛,可定量測定及重復使用,而且操作簡易。Gavin等應用蛋白芯片技術觀察代謝過程有關作用物和酶的相互作用關系。他們選擇3對蛋白激酶與作用物系統(tǒng),即依賴3,,5,—磷酸蛋白激酶—Kemptide;酪蛋白激酶Ⅱ—蛋白質磷酸酶抑制因子2和p42促有絲分裂劑激活蛋白(MAP)激酶(ErK2)—ElKl,首先將各系統(tǒng)的作用物按順序固定于3張BSA-NHS玻片上,分別在有核素7-s’PATP的環(huán)境中與不同蛋白激酶溫浴,然后,玻片經(jīng)用乳劑處理后可在光學顯微鏡下觀察到各種蛋白激酶催化特異的作用物產(chǎn)生磷酸化反應。其結果提示蛋白芯片技術可以應用于作用物與酶相互作用的研究及代謝機制的分析。

Gavin等還在蛋白芯片技術研究過程通過DIG、*和合成的六氫毗喧酮胺(即APl497)等3種具有對應的蛋白受體的小分子特質,研究蛋白的受體蛋白按順序固定的相互作用。他們首先將3種小分子物質的受體蛋白按順序固定于同一載體上并制備成相同的4張蛋白芯片,將BSA分別用不同的熒光物質(Alexa488、Cy3或Cy5)標記,并分別與DIC、*和AP 1 497等3種小分子物質結合成為探針,用每一種具有不同熒光標記的探針作用的芯片,結果只有能與小分子對應的受體蛋白被標上熒光。上述結果說明使用的熒光劑之間沒有交叉的熒光激發(fā)和發(fā)光作用。因此,將3種標記探針混合后作用于蛋白芯片,則可使3種不同的受體蛋白同時標記上不同的熒光。研究結果提示蛋白芯片技術對于新藥的發(fā)掘是十分有用的,因為它對尋找新藥作用的靶點非常方便。

雖然目前已經(jīng)成功地制出了第1張具有高通量分析平臺作用的蛋白芯片,通過適當?shù)募夹g處理可以使點樣蛋白保持天然的構象和生物學活性。但是,利用蛋白芯片技術對于蛋白質功能的研究仍然存在著種種問題,例如目前大多數(shù)來自于cDNA文庫的克隆體系不能通過正確的閱讀框架編碼蛋白質;或者不能正確表達產(chǎn)生具有氨基酸全序列的蛋白分子;通過細菌表達的蛋白質不能形成正常的空間構象等,都將直接影響有關蛋白質功能的研究。另外,為了方便種類繁多的蛋白質的功能檢測和分析,通過不同途徑或方式獲取并用于制作蛋白芯片的蛋白質必須首先經(jīng)過純化。正常和異常情況下蛋白質與蛋白質之間的相互作用的差別都需要我們進一步去探索。

綜上所述,高通量分析平臺蛋白芯片技術的建立將為蛋白質功能及其相關的研究提供快速、高信息量和更為直接的研究方法,與其他的分子生物學分析方法相比,蛋白芯片技術具有快速、平行的*性。該方法的建立和應用將有助于人類揭示疾病發(fā)生的分子水平的機制及尋找更為合理有效的治療手段和途徑。迄今為止,這一嶄新的技術仍存在一些缺陷,有待進一步完善和發(fā)展。

 


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