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脂肪酶(豬胰)
英文名稱:Lipase(pocine pancreas)
其他名稱:脂酶;脂肪水解酶;脂肪分解酵素
CAS號:9001-62-1
分子量:一般在20000到60000之間
活力:≥30000u/g
干燥失重:≤8.0%
性狀:白色或淡黃色粉末。屬脂肪加水分解酶類,和蛋白酶、淀粉酶并稱三大水解酶類。zui適溫度35~37℃。酶反應:甘油三酯+H2O=甘油二酯+脂肪酸陰離子。對一級酯基團zui易水解。甘油單酯是差的底物。有兩個差不多相同的同工酶脂肪酶: A與B。等電點(pI)A為4.9、 B為5.0。吸光系數(E1%280)13.3。激活劑為鈣(CA2+)。
溶解方法1:用90ML無Ca、Mg離子PBS溶解該酶,再加該PBS至100ML(該酶溶解較難,必要時在4度過夜以便溶解)。用時調PH7.2左右,用5.6%NaCO3調
溶解方法2:維持反應鍋內溶液80℃的溫度至少半小時,然后由夾層通入自來水降低鍋內溶液溫度至 50 ℃,按 1∶30的酶/底物比加入需要量的脂肪酶,在攪拌器連續攪拌下開始酶解反應,期間調整通入反應鍋夾層的蒸汽量使溫度維持在50℃。酶解反應過程中,為保證該酶的zui大生物活性使反應液的pH維持在8.0,這就需要不斷在反應液中加入NaOH稀溶液。自加入脂肪酶起6h后酶解反應結束
溶解方法3:準確稱取NaCl 8.00g,KCl 0.40g、Na2HPO4•7H2O 0.09g、KH2PO4 0.06g、酚紅0.01g、NaHCO3 0.35g,溶解于約800mL五蒸水中,充分溶解后定容至1000mL,分裝,滅菌備用,制成D-hanks液。準確稱取脂肪酶0.125g,溶解于100mL D-hanks液中 ,于4℃過夜,過濾分裝,-20℃保存備用
用途:生化研究。定量分析血清中甘油三酯。前列腺素脂的分析。脂肪分析。用于水解酯鍵1,3位,分解脂肪成甘油和脂肪酸
保存:2~8℃