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人流行性腮腺炎ELISA試劑盒說明書

2012-8-13  閱讀(1365)

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提  供  商 上海勁馬實驗設備有限公司 資料大小 110KB
資料類型 WORD 文檔 資料圖片 【點擊查看】
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人流行性腮腺炎ELISA試劑盒
 
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:                                                          96T
0pg/ml-160pg/ml
 
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中流行性腮腺炎含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人流行性腮腺炎水平。用純化的人流行性腮腺炎抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入流行性腮腺炎,再與HRP標記的流行性腮腺炎抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的流行性腮腺炎呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人流行性腮腺炎濃度。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(160pg/ml)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3. 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
4. 血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5. 尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
6. 細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。
7. 培養細胞
     檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
8. 組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
自備材料
1 蒸餾水。
2 加樣器:5ul、10ul50ul、100ul200、500ul、1000ul。
3 振蕩器及磁力攪拌器等
 
操作步驟
1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.          

80pg/ml
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
4opg/ml
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20pg/ml
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10pg/ml
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5pg/ml
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 
 
3.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
4.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
5.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
6.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
7.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
8.         溫育:操作同3。
9.         洗滌:操作同5。
10.     顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
11.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
12.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%
4. 局限性:6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
 
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8。
2.有效期:6個月
 

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