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膽汁酸(BA)競爭法ELISA實驗說明

2024-7-12  閱讀(440)

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檢測范圍:

0.1μmol/L -8μmol/L


使用目的:

本試劑盒用于測定相關液體樣本中膽汁酸(BA)的含量。


實驗原理

本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本中膽汁酸(BA)水平。用純化的膽汁酸(BA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入膽汁酸(BA),和HRP標記的膽汁酸(BA)抗原,使它們競爭結合,經過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的膽汁酸(BA)的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中膽汁酸(BA)的含量。 


標本要求 

1.標本處理:(1)水樣   采集后經 -20℃反復凍融三次,再經玻璃纖維過濾后,備查

(2)組織   樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,備查

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


操作步驟

1.加樣:分別設標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加50微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

2.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。   

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

8.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。


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