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勁馬生物|動物血清的常見問題

2024-6-21  閱讀(472)

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  血清是細胞培養中的重要元素之一,在實驗室操作中要注意及處理的方法:
 
  1.血清的保存
 
  血清應保存在-5℃~-2O℃。若存放于4℃,請勿超過一個月。若無法一次用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
 
  2.解凍血清的方法
 
  將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。(融解過程中必須規則地搖晃均勻)
 
  3如何處理血清解凍后的絮狀沉淀物
 
  血清中沉淀物的出現有許多種原因,但普遍原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,也是造成沉淀物的主要原因之一,但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。
 
  想要去除這些絮狀沉淀物,可將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液可接著加入培養基內一起過濾。(不建議以過濾的方法去除絮狀沉淀物,因為可能會阻塞過濾膜)
 
  4.為什么要熱滅活血清
 
  加熱可以滅活補體系統,激活的補體參與溶解細胞,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
 
  5.做熱滅活有必要嗎
 
  實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,大多數的細胞不需要。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完-全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響血清質量,造成細胞生長速率的降低。經過熱處理的血清,沉淀物的形成顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。(若非必要無需做此步驟,不但節省時間,也確保血清的質量)
 
  6.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀
 
  胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,不會影響血清的質量。(推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融)
 
  7.避免沉淀物的產生
 
  ①解凍血清時,按照所建議的步驟逐步解凍(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
 
  ②解凍血清時,請隨時搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
 
  ③請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
 
  ④血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
 
  ⑤若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。⑥溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增加。
 
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