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無外泌體血清是一種可由多種細胞分泌的直徑為30-150nm的膜性小囊泡。經(jīng)研究后發(fā)現(xiàn)，其內(nèi)含有獨-特的蛋白質(zhì)與核酸分子，所含成份與其細胞來源密切相關(guān)，這也決定了無外泌體血清的功能特異性，如抗原提呈、信號傳導(dǎo)或誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)、細胞遷移、細胞分化、細胞間通信、腫瘤轉(zhuǎn)移等。目前，無外泌體血清研究已經(jīng)成為臨床診斷與基礎(chǔ)醫(yī)生的新熱點。
以外泌體為代表的細胞外囊泡是近幾年研究的熱點，目前的外泌體研究主要通過研究體外培養(yǎng)細胞來源的外泌體，分析其在體內(nèi)外的功能作用。一般的血清FBS中含有供體細胞自然分泌的大量Exosomes，而用于Exosome研究的細胞必須提前更換無外泌體的血清進行培養(yǎng)，以減少對后續(xù)實驗結(jié)果的污染。
目前市面上存在著商業(yè)化的無外泌體血清，然而由于其價格較高等因素，很多研究者選擇自己制備無外泌體血清，而常用的主要是基于超速離心的無外泌體血清分離方法。
一、無外泌體血清產(chǎn)品特點：
1、內(nèi)毒素含量低，三次納米級過濾
2、嚴(yán)格控制批次差異
3、來源可靠、可溯源
4、每個批次提供相應(yīng)檢驗檢疫報告
5、適合各種特殊細胞培養(yǎng)
6、干冰運輸，建議存儲溫度為-20℃至-10℃
二、無外泌體血清制備步驟：
1. 根據(jù)需要處理的血清體積選擇合適的轉(zhuǎn)子與超離管。
2. 在超凈工作臺，將普通血清置于超離管中，配平后，進行熱封口。
3. 將封口后的超離管放于離心機轉(zhuǎn)子中，并加入相應(yīng)適配器然后擰緊轉(zhuǎn)頭蓋。
4. 設(shè)置離心程序：4℃，120,000 ×g，離心18小時（也有研究者選擇100,000 ×g離心18小時）。
5. 離心結(jié)束后，回收上清液，為避免污染，在超凈工作臺操作。
6. 收集得到無外泌體血清，并儲存于-20℃中備用。
三、無外泌體血清的這些注意事項請注意了：
1. 離心后，血清外泌體會富集在管底和管壁；
2. 吸取血清時，只吸取澄清部分的血清，并且遠離上圖中標(biāo)記的區(qū)域；
3. 吸取70-80%的澄清的血清；
4. 其余的渾濁血清留作正常細胞的的營養(yǎng)物添加使用，避免浪費。
5. 如果覺得純度不夠，再把離心后收集的血清做二次超速離心。
6. 針對超速離心后的血清，必須進行粒徑檢測（離心前樣品和離心后樣品），該數(shù)據(jù)可以放到文章補充材料中，用來證明無血清外泌體制備成功。
