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上海勁馬實驗設備有限公司
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【產品名稱】
中文名稱：大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）酶聯免疫試劑盒
【包裝規格】
96T/盒
【預期用途】
僅供科研使用，本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中血紅素氧合酶1（HO-1）含量。
【檢測原理】
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）水平。用純化的大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血紅素氧合酶1（HO-1），再與HRP標記的血紅素氧合酶1（HO-1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血紅素氧合酶1（HO-1）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠血紅素氧合酶1（HO-1）濃度。
【產品性能】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣(如有漏氣，不影響使用）。
2、劑量反應曲線線性
標準品劑量反應曲線相關系數r值，大于等于0.9900。
3、檢測范圍
70pg/ml-1700pg/ml 。
4、靈敏度
檢出劑量不能小于17.5pg/ml。
5、精密度
精密度用樣品測定值的變異系數CV 表示。CV（%） = SD/mean×100
批內差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批間差：選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定10 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。
批內差： CV<4.9%
批間差： CV<6.5%
6、回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
【操作步驟】
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
1600pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
800pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
400pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
200pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
100pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10-20分鐘。
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
注意：
1.試劑準備：試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。準備一次實驗所需要的酶標條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說明書要求保存，以備下次使用。
2.加樣：實驗操作中請使用一次性的滅菌吸頭，避免污染。加樣時注意不要有氣泡產生，將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。與反應試劑加入一樣，加樣過程中第一個孔與最后一個孔加樣時間間隔盡量小（一般控制在10 分鐘以內），如果太大，將會導致不同的“預溫育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。為了測值的準確性，推薦設置復孔進行實驗。
3.溫育：為防止樣品蒸發，實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發，洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態，同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4.洗滌：濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。充分洗滌非常重要，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液*甩干。洗滌過程中反應孔內殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干，勿將吸水紙直接放入反應孔中吸水，同時要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印，避免影響最后的酶標儀讀數。如果使用自動洗板機，請在熟練使用后再用于正式實驗過程中。
5.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如觀察到顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強而影響酶標儀光密度讀數。
6.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
