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廈門慧嘉生物科技有限公司
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更新時間:2018-06-03 12:10:02瀏覽次數(shù):371次
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廈門慧嘉生物*經(jīng)營人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒。誠信經(jīng)營,價格實惠,服務周到,質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來詢!: :
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產(chǎn)品名稱: 人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA Kit
產(chǎn)品英文: Human gastrin-reliasing peptide,GRP ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格: 96T
產(chǎn)品類別: 人特種蛋白檢測ELISA試劑盒[Human Special Protein ELISA Kit]
人胃泌素釋放多肽(GRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
預期應用
ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關液體中胃泌素釋放多肽(GRP)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中GRP水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被抗體的微孔中依次加入GRP抗原、*化的抗人GRP抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的GRP呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為10,000 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋成10,000 pg/ml,5,000 pg/ml ,2,500 pg/ml,1,250 pg/ml,625 pg/ml,312 pg/ml,156 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制5,000 pg/ml標準品:取0.5ml 10,000 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
2. 樣品稀釋液:1×20ml/瓶。
3. 檢測稀釋液A:1×10ml/瓶。
4. 檢測稀釋液B:1×10ml/瓶。
5. 檢測溶液A:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100ul),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。
6. 檢測溶液B:1×120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
7. 底物溶液:1×10ml/瓶。
8. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
9. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
標本的采集及保存
1.血清:標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
操作步驟
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00ul,余孔分別加標準品或待測樣品100ul,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul(取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
注:
1. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜。
3. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水
紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需
要,重復此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
特異性
本試劑盒可同時檢測重組或天然的人GRP,且與其它相關蛋白無交叉反應。
計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
2. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
3. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
5.在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
6.底物請避光保存。
說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且,洗滌不充分將影響試驗結果。
3. 試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期:6個月
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