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廈門慧嘉生物科技有限公司


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高品質96T 人載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)ELISA試劑盒

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更新時間:2015-06-12 09:15:32瀏覽次數:341次

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產品簡介

廈門慧嘉生物*經營人載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)ELISA試劑盒。誠信經營,價格實惠,服務周到,質量有保證。歡迎廣告老師來詢!: :

詳細介紹

廈門慧嘉生物*經營ELISA試劑盒及Santa/Abcam抗體、Prospec細胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物試劑產品。實驗為大,誠信經營,為客戶提供“zui高質量的產品”和“的服務”。歡迎廣大老師來詢!:   :  1048735792 或登陸http://www.biohj.com/download.aspx(向客服人員索取原版說明書)

產品名稱: 人載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)ELISA kit 

產品英文: Human Apolipoprotein A1 precursor,Pre-Apo-A1 ELISA kit 

產品規格: 96T 

產品類別: 人特種蛋白檢測ELISA試劑盒[Human Special Protein ELISA Kit]

人載脂蛋白A1前體(Pre-Apo-A1)酶聯免疫吸附測定試劑盒使用說明書

                                                                                 

本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!

預期應用

ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關生物液體中Pre-Apo-A1含量。

 

實驗原理

用純化的Pre-Apo-A1抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標本或標準品、*化的Pre-Apo-A1抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Pre-Apo-A1呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度( 值),計算樣品濃度。

 

試劑盒組成及試劑配制 

1、 酶標板:一塊(96孔) 

2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為25 ng/ml,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成25 ng/ml,12.5 ng/ml,6.25 ng/ml,3.12 ng/ml,1.56 ng/ml,0.78 ng/ml,0.39 ng/ml,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 ng/ml。如配制12.5 ng/ml標準品:取0.5ml (不要少于0.5ml )25 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。

6、 檢測溶液A:1×120  /瓶(1:100)。臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋(如:10  檢測溶液A / 990 檢測稀釋液A),充分混勻,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(100 /孔),實際配制時應多配制  0.1-0.2ml。

7、 檢測溶液B:1×120  /瓶(1:100)。臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

8、 底物溶液:1×10ml/瓶。

9、 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 

10、終止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。

11、覆膜:5張

12、使用說明書:1份

 

自備物品 

1、 酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

2、 微量加液器及吸頭,EP管

3、 蒸餾水或去離子水,濾紙

 

標本的采集及保存 

1、 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4 過夜后于1000 g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20 或-80 保存,但應避免反復凍融。

2、 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于 1000 g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20 或-80 保存,但應避免反復凍融。

3、 其它生物標本:請1000 g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20 或-80 保    存,但應避免反復凍融。

4、 樣本處理:血清或血漿標本*稀釋20倍。標本使用0.1 M 的PBS稀釋( PH=7.0-7.2)。

 

注:以上標本均應密封保存,4 保存應小于1周,-20 不應超過1個月,-80 不應超過2個月;標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

 

操作步驟

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1、 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?100  ,余孔分別加標準品或待測樣品100 ,注意不要有氣泡,加樣 時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時。為保證實驗結果有效

性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標板加上覆膜,37 溫育1小時。

3、 棄去孔內液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。 

4、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時。

5、 棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6、 每孔加底物溶液90 ,酶標板加上覆膜37 避光顯色(反應時間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。

7、 每孔加終止溶液50 ,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物    液的加入順序相同。

8、 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度( 值)。

 

注:

1、 試劑準備:所有試劑在使用前應平衡至室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2、 加樣:加樣或加試劑時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預溫育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內。*設置復孔進行實驗。

3、 溫育:為防止樣品蒸發,實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

4、 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標儀讀數。

5、 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配制使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請精確 配制標準品及工作液,盡量不要微量配制(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10 ),以避免由于不準確稀  釋而造成濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。

6、 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

7、 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。

     

洗板方法

1、 手工洗板方法:將*的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體,在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;根據需要,重復此過程數次。

2、 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

 

特異性

    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人Pre-Apo-A1,且與其它相關蛋白無交叉反應。

 

計算

  各標準品及樣本  值扣除空白孔  值后作圖(七點圖),如設置復孔,則 應取其平均值計算。以標準品的濃度為縱坐標(對數坐標), 值為橫坐標(對數坐標),在對數坐標紙上繪出標準曲線。*使用專業制作曲線軟件進行分析,如 curve expert 1.3,根據樣品 值,由標準曲線查出相應的濃度,乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與  值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的  值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

 

說明 

1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。

2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且,洗滌不充分將影響試驗結果。

3. 試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。

4. 濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。 

5. 剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F象,不會對實驗結果造成任何影響。 

6. 中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。

7. 所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

8. 有效期:6個月

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