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廈門慧嘉生物科技有限公司


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高品質(zhì)96T 人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)代理商

所  在  地廈門市

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更新時間:2022-07-12 14:55:30瀏覽次數(shù):655次

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產(chǎn)品簡介

廈門慧嘉生物*經(jīng)營人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒。誠信經(jīng)營,價格實惠,服務(wù)周到,質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來詢!: :

詳細(xì)介紹

廈門慧嘉生物*經(jīng)營ELISA試劑盒及Santa/Abcam抗體、Prospec細(xì)胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物試劑產(chǎn)品。實驗為大,誠信經(jīng)營,為客戶提供“zui高質(zhì)量的產(chǎn)品”和“的服務(wù)”。歡迎廣大老師來詢!:   :  1048735792 或登陸http://www.biohj.com/download.aspx(向客服人員索取原版說明書)

產(chǎn)品名稱: 人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA Kit 

產(chǎn)品英文: Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine,u-T3 ELISA Kit 

產(chǎn)品規(guī)格: 96T 

產(chǎn)品類別: 人激素類ELISA試劑盒[Human hormone ELISA Kit]

人高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用

特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的人u-T3,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

有效期:6個月

預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中u-T3含量。

說明 

1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。

2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。 

3.中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準(zhǔn)。

4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。

實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗u-T3抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗u-T3抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的u-T3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。 

試劑盒組成及試劑配制 

1. 酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔)。 

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。

3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4. *標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6. *標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 

9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 

10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

 

需要而未提供的試劑和器材

1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2. 高速離心機

3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱

4. 干凈的試管和Eppendof管

5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器

6. 蒸餾水,容量瓶等

標(biāo)本的采集及保存 

1. 血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注:標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

標(biāo)本的稀釋原則:

首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為1000 μg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋1000 μg/ml,500 μg/ml,250 μg/ml,125 μg/ml,62.5 μg/ml,31.2 μg/ml,15.6 μg/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 μg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。

如配制500 μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)1000 μg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

*標(biāo)記抗體的稀釋原則:

臨用前以*標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl*標(biāo)記抗體加990μl*標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。

辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:

臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。

操作步驟

實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加*標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl*標(biāo)記抗體加99μl*標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 

4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同*標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。

注:

1. 用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。 

3. 為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、*標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。

5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

洗板方法

手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 

注意事項

1. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。

5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時,請以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

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