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高品質(zhì)96T 人組胺（HIS）ELISA試劑盒

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

廈門慧嘉生物*經(jīng)營(yíng)人組胺(HIS)ELISA試劑盒。誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)，價(jià)格實(shí)惠，服務(wù)周到，質(zhì)量有保證。歡迎廣告老師來(lái)詢！: :

詳細(xì)介紹

廈門慧嘉生物*經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒及Santa/Abcam抗體、Prospec細(xì)胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物試劑產(chǎn)品。誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)，為客戶提供“zui高質(zhì)量的產(chǎn)品”和“的服務(wù)”。歡迎廣告老師來(lái)詢！: : 1048735792 或登陸http://www.biohj.com/download.aspx（向客服人員索取原版說(shuō)明書）

產(chǎn)品名稱：人組胺（HIS）ELISA Kit
產(chǎn)品英文： human Histamine,HIS ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格： 96T
產(chǎn)品類別：人內(nèi)分泌系列ELISA試劑盒[Human endocrine ELISA Kit]

人組胺（Histamine）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書

本試劑盒僅供研究使用

檢測(cè)范圍：0.47 ng/ml -30 ng/ml
zui低檢測(cè)限：0.2 ng/ml
特異性：本試劑盒可檢測(cè)人組胺，且與其他相關(guān)抗體無(wú)交叉反應(yīng)。
有效期：6個(gè)月
預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中組胺含量。
說(shuō)明
1. 試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。
2. 濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3. 中、英文說(shuō)明書可能會(huì)有不*之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。
4. 剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的人組胺包被酶標(biāo)板，制成固相載體。向微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品以及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品中抗體的含量。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                         一塊（96孔）。
2. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：                                     1×20ml/瓶。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品                                                              2瓶。
4. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺稀釋液
（HRP-rabbit anti-human histamine Diluent）：                      1×10ml/瓶。
5. 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺
（HRP-rabbit anti-human histamine）：                      1×60μl/瓶（1：100）。
6. 底物溶液（TMB Substrate）：                                     1×10ml/瓶。
7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：           1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
8. 終止液（Stop Solution）：                               1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的試劑和器材
1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標(biāo)本的采集及保存
1. 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或室溫過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200ng/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋30 ng/ml，15ng/ml，7.5 ng/ml，3.75 ng/ml，1.87 ng/ml，0.94 ng/ml，0.47ng/ml樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制15 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）30 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺的稀釋原則：
臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液50μl，余孔加待測(cè)樣品50μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，同時(shí)每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺工作液 50μl（取1μl酶標(biāo)記抗體加99μl酶標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制）。
2. 輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)30分鐘。
3. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)孔內(nèi)有明顯藍(lán)色，即可終止）。
5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)備注
1. 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人組胺工作液。
4. 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1. 本操作說(shuō)明適用于48T試劑盒，但48T試劑盒所有試劑減半。
2. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
3. 洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
4. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。
5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。