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廈門慧嘉生物科技有限公司
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閱讀:143發(fā)布時(shí)間:2016-3-1
人熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中人熱休克蛋白60(Hsp60)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
熱休克蛋白60(HSP60)是一類進(jìn)化上高度保守的蛋白質(zhì)家族。生理狀態(tài)時(shí)協(xié)助多肽或蛋白質(zhì)的正確轉(zhuǎn)位、折疊和裝配,,起“分子伴侶”的作用;在應(yīng)激狀態(tài)下,HSP60過表達(dá)或異位表達(dá),作為一種自身抗原被免疫系統(tǒng)識別,誘發(fā)機(jī)體的保護(hù)性免疫應(yīng)答,也可作為一種信號分子,在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮作用.近年來研究證實(shí)HSP60在自身免疫性疾病、傳染病、動脈粥樣硬化及慢性感染的發(fā)病中均發(fā)揮重要的作用。
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中HSP60水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入HSP60抗原、*化的抗人HSP60抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的HSP60呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
如配制5000 pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml 10000 pg/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
標(biāo)本的采集及保存
1.細(xì)胞培養(yǎng)物上清:請離心后收集上清,并將標(biāo)本保存于-20℃,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清:標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫。
注:
1. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
2.為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
特異性
本試劑盒可同時(shí)檢測重組或天然的人HSP60,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
5.在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí),請以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
6.底物請避光保存。
檢測范圍:
156 pg/mL -10000 pg/mL
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))。
2.有效期:6個(gè)月
3.濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
5.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準(zhǔn)。
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