大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
檢測范圍：0.1 ng /ml -25.6ng /ml
特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的睪酮，且與其他相關蛋白基本無交叉反應。
有效期：6個月（2-8℃避光保存）
預期應用：ELISA法定量測定大鼠血清，血漿及其它相關生物液體中睪酮含量。
說明
1. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
2. 剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。
實驗原理
采用競爭酶聯免疫法法檢測睪酮含量。首先用一株單抗體包被微孔板，制備成固相抗體，然后加入待測標本及辣根過氧化物酶標記的另一株單抗，使之形成包被抗體-睪酮-酶標記抗體的復合物。經顯色后在酶標儀測定吸光值（OD值），通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線，反算出待測標本中睪酮含量。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯板（Assay plate ）： 一塊（96孔）。
2. 標準品（Standard）： 5瓶（凍干品）。
標準品為凍干品，使用前分別用0.5ml蒸餾水溶解，溶解后濃度分別為：
| Standard 1 | Standard 2 | Standard 3 | Standard 4 | Standard 5 |
| 0.1ng/ml | 0.4ng/ml | 1.6ng/ml | 6.4ng/ml | 25.6ng/ml |
3. 酶結合物（HRP-conjugated antibody）： 1×6ml/瓶。
4. 顯色劑A（Substrate A）： 1×7ml/瓶。
5. 顯色劑B（Substrate B）： 1×7ml/瓶。
6. 濃洗滌液（Wash Buffer）： 1×15ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。
7. 終止液（Stop Solution）： 1×7ml/瓶
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規格酶標儀
2. 高速離心機
3. 電熱恒溫培養箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6. 蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
操作步驟
1. 將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時，取濃縮洗滌液，根據當批檢測數量，用蒸餾水上1：20稀釋，混勻后備用。
2. 標準品Standard 1- Standard 5，*次使用前先用0.5ml蒸餾水溶解，放置混勻后使用。
3. 將酶標板取出，設一個空白對照孔、不加任何液體；每個標準點依次各設兩孔，每孔加入相應標準品50ul；其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。
4. 每孔加入酶結合物50ul（空白對照孔除外），充分混勻，貼上不干膠封片，置37℃溫育2小時。
5. 手工洗板，棄去孔內液體。洗滌液注滿各孔，靜置10秒甩干，重復三次后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。
6. 每孔加顯色劑A液50μl，顯色劑B液50μl，振蕩混勻后，37℃避光顯色15分鐘，每孔加終止液50μl。
7. 用酶標儀讀數，取波長450nm，先用空白孔調零點，然后測定各孔OD值。
數據處理
1. 手工作圖：用雙對數坐標紙，以標準品濃度為橫軸，以對應的0D值為縱軸，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清OD值找到對應的濃度值。
2. 計算機：使用線性擬合功能，應將標準品S1-S5的濃度取對數（Log（濃度））作為X，將對應的OD值減去空白對照孔OD值后取對數（Log（OD值-NSB））作為Y，進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。
注意事項
1. 從冷藏環境中取出的試劑盒內全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫
（18-25℃）平衡30分鐘后方可使用，余者應及時封好口，放回2-8℃中避光保存，以備后用。
2. 使用前試劑應搖勻。
3. 結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。
4. 不同批號的試劑不可混用。
5. 加樣時應注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
6. 操作時，試劑盒內每種試劑各使用一個吸頭，每一種標準品使用一個吸頭，每一個樣品各使用一個吸頭，吸頭一次性使用。
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