今天我們給大家帶來的是細胞凋亡過程中我們有哪些指標的檢測。

01class細胞凋亡早期

細胞凋亡比較早期時，細胞膜即出現了一些改變，細胞膜磷脂雙分子層中的磷脂酰*從細胞膜內翻轉到細胞膜外，暴露于細胞膜；Annexin V 是一種Ca2+依賴的磷脂結合蛋白，在Ca2+存在的情況下，與磷脂酰*有很高的親和力，因此Annexin V是檢測細胞早期凋亡的靈敏指標。當AnnexinV 被熒光素標記時，可在流式細胞儀上或熒光顯微鏡下檢測到早期凋亡的細胞。同時，也可以利用PS外翻到胞外，利用其PS抗體進行檢測。

02class細胞凋亡中期

天冬氨酸特異性半*蛋白酶，通常以無活性的原酶形式存在于細胞中。其中Caspase 2、8、9及10作為起始Caspases，Caspase 3、6、7作為執行Caspases。在細胞凋亡中期，效應的caspases會被激活，可以通過檢測凋亡細胞的caspases活性及篩選caspases的激活劑或抑制劑，達到檢測caspases活性的目的。其檢測可以利用免疫捕獲法、抑制劑結合法及抗體WB檢測法。關于篩選凋亡的指標進行WB檢測法，Arigo提供了細胞凋亡指標的抗體對，相同的價格可以購買兩支抗體。如Apoptosis Marker Antibody Duo (Caspase3, PARP)及Mitochondria Apoptosis Initiator Antibody Duo (APAF1, Cytochrome c)。

03class細胞凋亡晚期

細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3‘-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或*形成的衍生物標記到DNA的3’-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為TUNEL法。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。

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DNA的片段化檢測：組成染色質的DNA鏈被激活的核酸內切酶切割，可形成180-200bp或其整倍數的片段化，電泳中呈特征性的“梯”狀條帶，這是判斷凋亡發生的客觀指標之一。

04class線粒體相關凋亡檢測方法

線粒體膜電位檢測：使用一種陽離子染料（JC-1），該染料在正常細胞內聚集在線粒體內，形成多聚體，發鮮紅色熒光；而在凋亡細胞內，由于線粒體膜電位的破壞，不能進入線粒體內，以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光。因此，根據紅綠熒光可以方便地區分正常和凋亡細胞。利用熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀可清楚地分辨這兩種不同的熒光信號。

*的檢測：*（cytochrome c ）位于線粒體內膜和外膜之間，在外界凋亡刺激物的作用下，可以從線粒體釋放到胞質內，并與胞質中的Apaf-1結合。*/Apaf-1復合物激活caspase-9，即而激活caspase-3及其下游的caspases，啟動凋亡過程。從細胞質中分離富線粒體的組分，然后用試劑盒的* 抗體，通過Fluorescent、Western Blot方法檢測* 從線粒體到細胞質的釋放。

*（GSH）檢測：許多細胞發生凋亡時，細胞漿內的谷光苷肽（GSH）水平會降低，此現象發生在細胞凋亡非常早的階段，因此檢測*的水平可以早期判斷和檢測凋亡。

NO( 一氧化氮) 檢測：NO 參與細胞凋亡的調節，凋亡細胞中NO 的合成速度遠高于正常細胞，因此檢測凋亡細胞中的NO水平有助于更好的了解NO對細胞凋亡的調控機制。 NO 均被氧化為亞硝酸鹽(NO2-)和亞硝酸鹽(NO3-)，用這些陰離子的濃度可用來定量所產生的NO的濃度。

05class凋亡相關信號通路分子的檢測

Bcl-2家族活性檢測

組蛋白H2A.X和H2B：凋亡發生時會發生染色質DNA的濃集，濃集的DNA可以被caspase相關的DNA酶斷裂，同時組蛋白H2B的14位絲氧酸發生磷酸化修飾。組蛋白H2B的14位*發生磷酸化修飾是凋亡不可逆進展的重要標志

端粒酶活性檢測試劑盒

06class凋亡抑制劑和誘導劑凋亡誘導劑如放xian菌素(actinomycin），*(camptothecin)，放xian菌酮(cyclotleximide)，*(dexamethasone)，足葉已甙(etoposide)等。07class凋亡分析的總體原則

因為凋亡是多因素、多通路參與的過程，不能根據單一指標來判斷調亡；所以需進行多指標同時檢測。

由于凋亡細胞不同時間出現的凋亡事件不同；而每個指征維持有一段，所以需要在不同的時間點進行采樣，以保證檢測結果的準確性。

實驗需要設定陽性和陰性對照，避免出現假陽性或者假陰性

根據實驗對象（材料）的具體情況、設備配套等選擇可行的方案

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