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當(dāng)前位置:上海子實生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>動物細胞培養(yǎng)的基本概念
高等生物是由多細胞構(gòu)成的整體,在整體條件下要研究單個細胞或某一群細胞在體內(nèi)(in vivo)的功能活動是十分困難的。但是如果把活細胞拿到體外(in vitro)培養(yǎng)進行觀察和研究,則要方便得多。活細胞離體后要在一定的生理條件下才能存活和進行生理活動,特別是高等動植物細胞要求的生存條件極其嚴(yán)格,稍有不適就要死亡。所以細胞培養(yǎng)技術(shù)(cell culture)就是選用生存條件對活細胞進行培養(yǎng)和研究的技術(shù)。
動物細胞的生存環(huán)境與植物細胞差別很大,因而二者的培養(yǎng)方法很不相同。
細胞培養(yǎng)方式大致可分為兩種(圖2-25):一種是群體培養(yǎng)(mass culture),將含有一定數(shù)量細胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中,讓細胞貼壁生長,匯合(confluence)后形成均勻的單細胞層;另一種是克隆培養(yǎng)(clonal culture),將高度稀釋的游離細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,各個細胞貼壁后,彼此距離較遠,經(jīng)過生長增殖每一個細胞形成一個細胞集落,稱為克隆(clone)。一個細胞克隆中的所有細胞均來源于同一個祖先細胞。此外,為了制取細胞產(chǎn)品而設(shè)計了轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法,使用大容量的圓培養(yǎng)瓶,在培養(yǎng)過程中不斷地轉(zhuǎn)動,使培養(yǎng)的細胞始終處于懸浮狀態(tài)之中而不貼壁。
目前實驗室中常用的幾種細胞系
細胞系名稱 細胞類型 來源
3T3 成纖維細胞 小鼠
HeLa 宮jing癌上皮細胞 人
BHK21 成纖維細胞 敘利亞倉鼠
PtKl 上皮細胞 袋鼠
L6 成肌細胞 大鼠
PCI2 嗜鉻細胞 大鼠
SP2 漿細胞 小鼠
SP2/0 骨髓瘤漿細胞 小鼠
CHO 卵巢細胞 中國地鼠
正常細胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限,如人胚成纖維細胞可傳30-50代,相當(dāng)于150-300個細胞增殖周期。癌細胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞則能無限培養(yǎng)下去,所謂轉(zhuǎn)化即是指正常細胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細胞。目前世界上許多實驗室所廣泛傳用的HeLa細胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮jing癌細胞培養(yǎng)而成,此細胞系一直延用至今。
原代培養(yǎng)(primary culture):也叫初代培養(yǎng),指直接從體內(nèi)取出的細胞、組織和器官進行的*次的培養(yǎng)物。一旦已進行傳代培養(yǎng)(subculture)的細胞,便不再稱為原代培養(yǎng),而改稱為細胞系。
傳代(passage):將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代或傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)細胞的“一代”,不表示細胞分裂一次,而是指培養(yǎng)細胞從接種到再次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)的過程。在一次傳代培養(yǎng)中,細胞能倍增3-6次。
細胞系(cell line):原代培養(yǎng)物成功傳代后,則稱之為細胞系。如細胞系的生存期有限,則稱之為有限細胞系(finite cell line);已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細胞系,稱連續(xù)細胞系或無限細胞系(infinite cell line)。無限細胞系大多已發(fā)生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細胞,因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞系。無限細胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性 。
細胞株(cell strain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群,亦可稱之為亞株(substrain)。
克隆(clone):亦稱無性繁殖系或簡稱無性系。對細胞來說,克隆是指由同一個祖先細胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細胞群。
二倍體細胞(diploid cells):染色體數(shù)目與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同(2n細胞占75%或80%以上)的細胞群。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期,故屬有限細胞系。
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