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更新時(shí)間:2024-11-06 15:50:00瀏覽次數(shù):570次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 貨號(hào) | GOY-01X1739 |
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生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞處理:
1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
商品屬性
鑒定 | STR鑒定正確 | 種屬 | 人 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 分類 | 人細(xì)胞系 |
商品介紹
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)方案A(默認(rèn))
生長(zhǎng)培養(yǎng)基:
MEM(含NEAA)+10% FBS+1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相:空氣,95%;CO2,5%, 溫度:37℃
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來(lái)源文獻(xiàn))
背景描述 PLC/PRF/5細(xì)胞分泌乙肝病毒表面抗原(HBsAg);PLC/PRF/5細(xì)胞原先被支原體污染,后用BM-cycline去除支原體。
細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟:
(1)當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí),進(jìn)行傳代。
(2)吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次,搖勻后棄掉。
(3)加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。
(4)培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化,3min左右拿出,用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量,發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落,加入2倍量的中止消化,并吹打均勻,避免消化過(guò)度。
(5)細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi),1000rpm/min離心3~5min。
(6)吸棄上清,加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,吹打細(xì)胞使其均勻分散。
(7)吸棄細(xì)胞懸液,選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻,放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
(8)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
(9)細(xì)胞凍存
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
公司正在出售的產(chǎn)品:
大鼠葡萄糖60酸異構(gòu)酶(GPI)檢測(cè)試劑盒 ,英文名: GPI ELISA Kit
Mouse plasma alpha granule membrane protein (GMP-140) ELISA Kit 小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測(cè)試劑盒
Ratai-IVIgGaibodyELISAKit 大鼠抗IVIgG抗體檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGP-II(HumanGlycogenphosphorylaseII)ELISAKit人糖原0酸化酶同工酶II
細(xì)胞蛋白巰基/結(jié)合巰基含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次
Rattissueinhibitorsofmetalloproteinase4,TIMP-4ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)檢測(cè)試劑盒規(guī)格:96T/48T
SIRPA重組大鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白 Protein
DISC1(disrupted in schizophrenia1 0.5mgDISC1(disrupted in schizophrenia1)(CT) DISC1 C端抗原
GALK1重組人 GALK1 / Galactokinase / Galactose kinase 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
CYB5R1 Protein Human 重組人 CYB5R1 蛋白
TNFRSF14 Protein Mouse 重組小鼠 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
DISC1(disrupted in schizophrenia1 0.5mgDISC1(disrupted in schizophrenia1)(CT) DISC1 C端抗原
CYB5R1 Protein Human 重組人 CYB5R1 蛋白
SIRPA重組大鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白 Protein
TNFRSF14 Protein Mouse 重組小鼠 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
GALK1重組人 GALK1 / Galactokinase / Galactose kinase 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
PLC/PRF/5人肝癌細(xì)胞小鼠0酸葡萄糖變位酶(PGM)檢測(cè)試劑盒 96T/48T
Human prealbumin (PA) ELISA Kit 人前白蛋白(PA)檢測(cè)試劑盒
Humanmyosinheavychain,MHCELISAKit 人肌球蛋白重鏈(MHC)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanadeno-associatedvirus,AAV檢測(cè)試劑盒人腺相關(guān)病毒(AAV)檢測(cè)試劑盒規(guī)格:96T/48T
直腸標(biāo)記K-ras糞便檢測(cè)突變巢式分析試劑盒50次
Mousealpha-L-fucosidase,AFUELISAKit小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)檢測(cè)試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠膠原酶II(CollagenaseII)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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