人抑制素ELISA試劑盒說明書

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人抑制素 水平。用純化的人抑制素抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抑制素，再與 HRP標(biāo)記的抑制素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抑制素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人抑制素濃度。
試劑盒組成
  30 倍濃縮洗滌液  20ml× 瓶  7  終止液  6ml× 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml× 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（3000pg/mL）   0.5ml× 瓶
3  酶標(biāo)包被板  2 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  .5ml× 瓶
4  樣品稀釋液  6ml× 瓶  0  說明書  份
5  顯色劑 A 液  6ml× 瓶    封板膜  2 張 
6  顯色劑 B 液  6ml×/瓶  2  密封袋 個
標(biāo)本要求
．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
500pg/mL  5 號標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
750pg/mL  4 號標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
375pg/mL  3 號標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
87.5pg/mL  2 號標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
93.75pg/mL  號標(biāo)準(zhǔn)品50µl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 50µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣：分別設(shè)空白孔 （空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 0µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
0 分鐘.
0.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。  測定應(yīng)在加終止
液后 5 分鐘以內(nèi)進(jìn)行