實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

彈性軟骨僅存在高等動物外耳廓、聽道、會咽等處。與其它軟骨相比，間質(zhì)中含有大量交織成網(wǎng)的彈性纖維，成網(wǎng)狀在軟骨內(nèi)排列，同時含有少量膠原纖維。目前，彈性軟骨大多被用于修復(fù)人類殘缺及畸形耳廓及其它美容修復(fù)。

細(xì)胞特性：

1） 組織來源于實驗動物的耳組織。

2) 細(xì)胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細(xì)胞生長方式：梭狀，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf原代 上皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)試劑。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)檢測試劑盒 ，英文名： IDH1 ELISA Kit

Mouse leptin receptor (LR/Ob-R) ELISA Kit 小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)檢測試劑盒

MouseSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit 小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumandesmin,DesELISAKit人結(jié)蛋白

細(xì)胞Akt1/PKBa激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20/50/100

ELISAKitNF-κBp65大鼠核因子-κB亞基p65親和肽

IL25重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ERK(Extracellular signal-regulated kinase 0.5mgERK(Extracellular signal-regulated kinase) 原活化蛋白激酶抗原

FGFR4重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

ENPP2 Protein Human 重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白

CNTNAP2 Protein Mouse 重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白

ERK(Extracellular signal-regulated kinase 0.5mgERK(Extracellular signal-regulated kinase) 原活化蛋白激酶抗原

ENPP2 Protein Human 重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白

IL25重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CNTNAP2 Protein Mouse 重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白

FGFR4重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein

小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat soluble cell differeiation aigen 14 (sCD14) ELISA Kit 大鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原14(sCD14)檢測試劑盒

Humaetinoicacidinduciblegene/RIG-likereceptor,RLR-9ELISAKit 人酸誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-fibrillarinaibody,AFA/snoRNP/U3RNP檢測試劑盒人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物精(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20次

HumanVitaminD2，VD2ELISAKit人2(VD2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠耳軟骨細(xì)胞小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽檢測試劑盒   小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽試劑盒、小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠超敏C反應(yīng)蛋白檢測試劑盒   小鼠超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒、小鼠超敏C反應(yīng)蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠補體片斷檢測試劑盒   小鼠補體片斷試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠補體片斷試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠補體片斷試劑盒、小鼠補體片斷eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠補體蛋白檢測試劑盒   小鼠補體蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠補體蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠補體蛋白試劑盒、小鼠補體蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。