① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠終板軟骨細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Mouse Endplate Chondrocyte Cells

組織來(lái)源：椎間盤(pán)

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠終板軟骨分離自椎間盤(pán)終板軟骨組織；椎體終板是椎體在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構(gòu)成椎間盤(pán)。椎體終板構(gòu)成了椎間盤(pán)的上下邊界，位于椎體中心的松質(zhì)骨和椎間盤(pán)之間。是由軟骨下骨和厚度相當(dāng)?shù)母采w其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤(pán)髓核組織嵌入椎體，同時(shí)具有平衡分散應(yīng)力的作用。成熟的終板軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些終板軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱(chēng)為同源細(xì)胞群。電鏡下，終板軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的終板軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠終板軟骨采用膠原酶 - 聯(lián)合消化并結(jié)合軟骨細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠終板軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件：

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠終板軟骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠4-羥基壬烯酸(HNE)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： HNE ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase inhibitor 2 (TIMP-2) ELISA Kit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)檢測(cè)試劑盒

Mouseypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit 小鼠原激活肽(TAP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumaeninELISAKit人腎素

通用型豬口蹄疫(footandmohdisease;FMD)試劑盒20次

ELISAKitBNP大鼠腦素/腦尿肽

HAVCR1重組食蟹猴 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

Mtp53(Mutant type p53 0.5mgMtp53(Mutant type p53) 突變型P53抗原

YES1重組人 c-Yes / YES1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

ECSIT Protein Human 重組人 ECSIT 蛋白

AGRP Protein Mouse 重組小鼠 AGRP 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Mtp53(Mutant type p53 0.5mgMtp53(Mutant type p53) 突變型P53抗原

ECSIT Protein Human 重組人 ECSIT 蛋白

HAVCR1重組食蟹猴 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 Protein

AGRP Protein Mouse 重組小鼠 AGRP 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

YES1重組人 c-Yes / YES1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白5(MIP-5)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human chorionic gonadoopin (HCG) ELISA Kit 人絨毛膜(HCG)檢測(cè)試劑盒

HumanHelicalPeptideELISAKit 人螺旋肽(HelicalPeptide)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAnnexinⅤ,ANX-Ⅴ檢測(cè)試劑盒人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物胱(cystine)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISAKit人β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠終板軟骨細(xì)胞小鼠鈣通道阻滯劑檢測(cè)試劑盒   小鼠鈣通道阻滯劑試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠鈣通道阻滯劑試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠鈣通道阻滯劑試劑盒、小鼠鈣通道阻滯劑eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠分泌型免疫球蛋白檢測(cè)試劑盒   小鼠分泌型免疫球蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠分泌型免疫球蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠分泌型免疫球蛋白試劑盒、小鼠分泌型免疫球蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠分泌型0脂酶檢測(cè)試劑盒   小鼠分泌型0脂酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠分泌型0脂酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠分泌型0脂酶試劑盒、小鼠分泌型0脂酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子檢測(cè)試劑盒   小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子試劑盒、小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用