實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

雞氣管上皮分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環狀軟骨構成，有彈性，軟骨為“C"字形的軟骨環，缺口向后，各軟骨環以韌帶連接起來，環后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接，保持了持續張開狀態。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環境接觸的道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質作用的靶細胞，還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質和細胞因子從而參與氣道炎癥及免疫反應。體外培養的原代氣管上皮細胞因與體內組織在形態結構和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎及臨床研究中極為重要。

方法簡介：

公司實驗室分離的雞氣管上皮采用-連酶蛋白酶混合消化法，并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的雞氣管上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠Ⅰ型前膠原(PCⅠ)檢測試劑盒 ，英文名： PCⅠ ELISA Kit

Mouse leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 小鼠黃體生成素釋放激素(LHRH)檢測試劑盒

MouseOrexinAELISAKit 小鼠阿立新A(OrexinA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumansnailhomolog2,SNAI2ELISAKit人蝸牛同源物2

通用型幽門螺桿菌Helicobacterpylori試劑盒20次

ELISAKitCoisol大鼠

AMY2A重組食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 Protein

IL-8 白介素8(白細胞介素-8 0.5mgIL-8 白介素8(白細胞介素-8)(抗原)

SEMA4A重組人 Semaphorin 4A / SEMA4A / Semaphorin B 蛋白 Protein

EIF3K Protein Human 重組人 EIF3K 蛋白 (His & GST 標簽)

GFRA3 Protein Mouse 重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (Fc 標簽)

IL-8 白介素8(白細胞介素-8 0.5mgIL-8 白介素8(白細胞介素-8)(抗原)

EIF3K Protein Human 重組人 EIF3K 蛋白 (His & GST 標簽)

AMY2A重組食蟹猴 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 Protein

GFRA3 Protein Mouse 重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (Fc 標簽)

SEMA4A重組人 Semaphorin 4A / SEMA4A / Semaphorin B 蛋白 Protein

小鼠交聯物(PY)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ferritin (FE) ELISA Kit 人鐵蛋白(FE)檢測試劑盒

Humaeceptoyrosinekinase,KsELISAKit 人受體酪激酶(Ks)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanBreastandkidneyexpressedchemokine,BRAK檢測試劑盒人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)檢測試劑盒規格：96T/48T

植物組織細胞核粗提分離試劑盒20次

Humansphingomyelin,SMELISAKit人鞘0脂(SM)檢測試劑盒規格：96T/48T

雞氣管上皮細胞小鼠催乳素(PRL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抵抗素(Resistin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠乙酰受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱   方法   規格