實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠棕色脂肪干分離自棕色脂肪組織；動物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪，白色脂肪堆積在皮下，負責儲存多余熱量；棕色脂肪負責分解引發(fā)肥胖的白色脂肪，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳、水和熱量，本身不儲存熱量。棕色脂肪組織呈棕色，其特點是組織中有豐富的毛細血管，脂肪細胞內(nèi)散著許多小脂滴，線粒體大而豐富，核圓形，位于細胞中央，這種脂肪細胞也稱為多泡脂肪細胞。棕色脂肪組織在成年動物極少，新生兒及冬眠動物較多，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū)、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發(fā)揮作用，它們堆積在新生兒肩胛處，幫助維持體溫。隨著年齡增長，棕色脂肪會逐漸消失。終，動物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細胞，分布于頸部和鎖骨。脂肪干細胞（ADSCs）是一種具有多向分化潛能的干細胞，主要恢復組織細胞的修復功能，促進細胞的再生，恢復年輕面容的同時，身體機能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂肪干細胞具有很多優(yōu)點：①具有自我更新及多向分化的潛能；②來源充足；③對供區(qū)的創(chuàng)傷較小；④獲得率及體外擴增速率高。脂肪干細胞是目前被廣泛應用于組織工程領(lǐng)域中理想的種子細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠棕色脂肪干采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠棕色脂肪干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠C-肽(C-Peptide)檢測試劑盒 ，英文名： C-Peptide ELISA Kit

People two asymmeic dimethylarginine (ADMA) ELISA Kit 人不對稱二甲基精(ADMA)檢測試劑盒

DuckIerleukin2,IL-2ELISAkit 鴨白介素2(IL-2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCA125卵巢癌相關(guān)抗原

細菌蛋白胨鐵瓊脂平板50個

Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

MSR1重組小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 蛋白 Protein

bFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原 0.5mgbFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原)

ALPI重組人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CDC42BPB Protein Human 重組人 CDC42BPB 蛋白 (His & GST 標簽)

CD226 Protein Rat 重組大鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (Fc 標簽)

bFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原 0.5mgbFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原)

CDC42BPB Protein Human 重組人 CDC42BPB 蛋白 (His & GST 標簽)

MSR1重組小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 蛋白 Protein

CD226 Protein Rat 重組大鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (Fc 標簽)

ALPI重組人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein receptor 1A (BMPR-1A) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)檢測試劑盒

Humayrosinehydroxylase,THELISAKit 人酪羥化酶(TH)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenHyaluronicacid,HA檢測試劑盒雞透明質(zhì)酸(HA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞COLLAGENII蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein40,Hsp-40ELISAKit小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠棕色脂肪干細胞小鼠雄烯二(ASD)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠雄激素(androgen)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠信號轉(zhuǎn)導分子7(Smad7)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝