實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮分離自腦靜脈組織；與腦動(dòng)脈相比，腦靜脈管壁較薄。與身體其他部位的靜脈不同，腦靜脈管壁中沒有靜脈瓣，靜脈血的回流依賴高位的勢能。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為：大部腦靜脈血經(jīng)腦深部靜脈和腦血竇流入頸內(nèi)靜脈醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理；小部腦靜脈血經(jīng)眼部翼狀靜脈叢，進(jìn)入靜脈導(dǎo)血管再到頭皮，最后流入椎管中的椎旁靜脈系統(tǒng)。腦靜脈系統(tǒng)有大量交通枝靜脈叢，即使兩側(cè)頸內(nèi)靜脈都被阻塞，大腦靜脈血仍可經(jīng)椎靜脈和頸外靜脈系統(tǒng)完成其回流。腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的主要功能是維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)參與免疫反應(yīng)，維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶16(MMP16)檢測試劑盒 ，英文名： MMP16 ELISA Kit

Mouse histone H2b (histon-H2b) ELISA Kit 小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)檢測試劑盒

Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit 大鼠原激活肽(TAP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforF1+2(Humanprothrombinfragme1+2)ELISAkit人原片段F1+2

細(xì)胞結(jié)構(gòu)型內(nèi)皮細(xì)胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Ratmyelinbasicprotein,MBPELISAKit大鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

VTCN1重組小鼠 B7-H4 / B7S1 / B7x 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

白介素8受體α(IL8Rα)重組蛋白 Recombinant Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)

IL1R2重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 Protein

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

白介素8受體α(IL8Rα)重組蛋白 Recombinant Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

VTCN1重組小鼠 B7-H4 / B7S1 / B7x 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

IL1R2重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 Protein

小鼠漢坦病毒(HV)檢測試劑盒 96T/48T

Adrenaline (EPI) ELISA Kit 人(EPI)檢測試劑盒

humanEndothelin1,ET-1ELISAKit 人內(nèi)皮素1(ET-1)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-parainfluenzavirusIgMaibody,ai-PIVIgM檢測試劑盒人抗副流感病毒IgM抗體(ai-PIVIgM)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物細(xì)胞壁鈣熒光白(Calcofluorwhite;CFW)熒光染色試劑盒20次

Humayrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains2,Tie-2ELISAKit人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激酶2(Tie-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞小鼠α羥基脫氫酶(αHBDH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠α甘露糖苷酶(αManase)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝