產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產品英文名稱：Caspase-9 Assay Kit (Colorimetric)

產品中文名稱：Caspase-9 活性分析試劑盒（比色法）

規格：20T/50T/100T

貨號：EY-01X8540
用途：僅供科研研究實驗

特點&優勢:

•  簡單，優化的實驗方法。

•  操作方便快捷。

•  檢測早/中期的細胞凋亡。

保存建議:請參閱說明書中各個組件的存儲條件，自發貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

Caspase全稱為含半的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一類蛋白酶家族，成員較多，在人類，已經鑒定了11種不同的caspase，根據其蛋白酶序列的同源性可分為3個亞族：Caspase-1亞族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亞族包括Caspase-2、9； Caspase-3亞族包括Caspase-3、6、7、8、10。起細胞凋亡執行者作用的是caspase3,6,7。

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產品：

A Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40 0.1mgA Beta1-40 (H-3-me6;H-3-me13;H-3-me14; Beta-Amyloid 1-40) β淀粉樣肽1-40(結構改造)

ECE1 Protein Human 重組人 ECE1 蛋白

PLA2G2E重組小鼠 PLA2G2E 蛋白 Protein

EDAR Protein Rat 重組大鼠 EDAR 蛋白 (Fc 標簽)

HMGN3重組人 HMGN3 蛋白 Protein

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Rat ai smooth muscle aibody (ASMA) ELISA Kit 大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)檢測試劑盒

HumanCailageglycoprotein39,HCgp-39ELISAKit 人軟骨糖蛋白39(HCgp-39)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanangiotensionⅡreceptor1Aibody,ATⅡR1Ab檢測試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體1抗體(ATⅡR1)檢測試劑盒規格：96T/48T

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小鼠高密度脂蛋白（HDL）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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大鼠α-輔肌動蛋白1(ACTN-1)檢測試劑盒 ，英文名： ACTN-1 ELISA Kit

Mouse monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1/CCL2/MCAF) ELISA Kit 小鼠單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)檢測試劑盒

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CLIAKitforIGFBP-6(MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein6)ELISAkit小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白6

通用型牛弓形體剛地弓形蟲病(Toxotest;Toxoplasmagondii)試劑盒20次

ELISAKitTAFI大鼠纖溶抑制因子

Caspase-9 活性分析試劑盒（比色法）LYVE1重組小鼠 LYVE1 / LYVE-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

低密度脂蛋白受體(LDLR)重組蛋白 Recombinant Low Density Lipoprotein Receptor (LDLR)

EEF1B2重組人 EF1B / EEF1B2 蛋白 Protein

ECE1 Protein Human 重組人 ECE1 蛋白

TNFRSF10D Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 (Fc 標簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。