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所 在 地上海市
更新時間:2021-03-29 13:23:20瀏覽次數(shù):431次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
下列是產(chǎn)品的訂購信息:
產(chǎn)品名稱 | OK細胞,負鼠腎細胞價格 |
英文名稱 | OK cells, opossum kidney cells |
貨號 | EY-X64170 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
AsPC-1(人胰腺細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠成肌細胞C2C12
鱗狀細胞抗原2(SCCA2)重組蛋白Recombinant Squamous Cell Carcinoma Antigen 2 (SCCA2)
三硝基苯甲基硝胺梭菌 Clostridium saccharoacetobutylicim嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
人腺細胞Hs 578T
葡萄糖酪胨瓊脂/Dextrose Casein Peptone Agar食品中蠟樣芽孢桿菌鑒定和計數(shù)250克國產(chǎn)/進口
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞人結(jié)腸粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基
大鼠肺大動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
EDTA Buffer(50x)/EDTA 緩沖液(IHC抗原修復液, 50x)100ml國產(chǎn)
大鼠腎足突細胞*培養(yǎng)基小鼠肺成纖維細胞*培養(yǎng)基
大鼠支氣管成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
OK細胞,負鼠腎細胞價格牛磺酸偶聯(lián)牛血清白蛋白(β-氨基乙磺酸)Taurine/BSA 1mg
熒光素Cy5標記牛血清白蛋白BSA/Cy5 0.1ml
熒光素Cy5.5標記牛血清白蛋白BSA/Cy5.5 0.1ml
熒光素Cy3標記牛血清白蛋白BSA/Cy3 0.1ml
熒光素標記豬胰島素蛋白Insulin Protein/FITC 0.5ml
熒光素FITC標記兔IgG(細胞流式同型對照)Rabbit IgG/FITC 0.3ml
熒光素標記雞卵白蛋白OVA/FITC 0.3ml
熒光素標記牛IgGBovine IgG/FITC 0.3ml
熒光素標記牛IgMBovine IgM/FITC 0.3ml
熒光素標記雞IgGChicken IgG/FITC 0.3ml
熒光素標記雞IgMChicken IgM/FITC 0.3ml
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