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細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
下列是產品的訂購信息:
產品名稱 | H125細胞,人肺癌細胞規格 |
英文名稱 | H125 cells, human lung cancer cells |
貨號 | EY-X63764 |
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
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培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
特女貞苷 CAS 111926-2011 規格:20mg 訂購|咨詢
皂苷 A ;Clidiside CAS 916347-31-4 規格:20mg 訂購|咨詢
L- CAS 56-89-3 規格:20mg 訂購|咨詢
酸長春新堿 CAS 規格:HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
重樓皂苷 Ⅵ CAS 76296-75-8 規格:20mg 訂購|咨詢
乙羧草;純品型;標準品;有證書 CAS 77501-60-1 規格:0.25g 訂購|咨詢
染料木苷 CAS 529-59-9 規格:20mg 訂購|咨詢
素 CAS 63968-64-9 規格:UV≥99%,20mg/vial 訂購|咨詢
5-羥色胺酸; 5-羥基 CAS 56-69-9; 4350-09-8 規格:HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢
除線磷;純品型;標準品;有證書 CAS 97-17-6 規格:0.1g 訂購|咨詢
野菊花內酯 CAS 規格:10mg 訂購|咨詢
H125細胞,人肺癌細胞規格雷帕霉素靶蛋白復合體2抗體 英文名稱:RICTOR 0.2ml
核轉錄因子NFKB-RelB蛋白抗體 英文名稱:RelB 0.2ml
細胞周期檢控Rad17蛋白抗體(復制因子C) 英文名稱:Rad17 0.1ml
磷酸化細胞周期檢控Rad17蛋白抗體 英文名稱:Phospho-Rad17 (Ser645) 0.1ml
受體結合激酶2抗體 英文名稱:RIP2 0.2ml
/激酶p90RSK蛋白抗體 英文名稱:p90RSK 0.1ml
磷酸化受體結合激酶2抗體 英文名稱:Phospho-RIP2 (Ser176) 0.1ml
染色體濃縮調控蛋白1抗體 英文名稱:RCC1 0.2ml
磷酸化染色體濃縮調控蛋白1抗體 英文名稱:Phospho-RCC1 (Ser11) 0.1ml
S6核糖體蛋白抗體 英文名稱:RPS6 0.1ml
核糖體S6蛋白激酶抗體 英文名稱:RPS6KB1 0.1ml
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